苦丁茶中三萜皂苷元的提取純化研究.pdf

1、苦丁茶主產(chǎn)于廣東、廣西和海南，是當(dāng)?shù)孛耖g傳統(tǒng)的藥用植物，歷代中醫(yī)文獻(xiàn)對其功能多有記載，現(xiàn)代藥理研究證明它具有多種藥理活性和功效，臨床應(yīng)用前景樂觀，作為一種新藥開發(fā)具有很高的價值。本實(shí)驗(yàn)以三萜皂苷元含量為指標(biāo)，通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)確定其提取純化工藝的最佳條件，從而為實(shí)現(xiàn)苦丁茶中三萜皂苷元的工業(yè)化生產(chǎn)提供了科學(xué)依據(jù)，具有一定的理論意義和應(yīng)用價值。 1.采用薄層層析定性分析苦丁茶三萜皂苷元并優(yōu)化確定了溶劑體系。甲苯：乙酸乙酯：冰醋

2、酸(20:4:0.6)分離熊果酸；環(huán)己烷：氯仿：乙酸乙酯：甲醇(20:5:4:2)分離齊墩果酸，展開效果較好。采用此溶劑體系進(jìn)行薄層層析有助于快速準(zhǔn)確判斷柱色譜分離。 2.建立了HPLC法同時測定苦丁茶中熊果酸和齊墩果酸含量的方法。色譜條件：色譜柱為KromasilC18(150×4.6mm，5μm)；流動相為甲醇：水：冰醋酸(體積比85:15:0.2)，用微濾膜過濾后，超聲脫氣20min；柱溫為室溫；檢測波長為220nm；流速

3、為1mL/min；進(jìn)樣量為10μL。 3.確立了苦丁茶三萜皂苷元含量的分光光度分析法。以熊果酸為對照品，采用香草醛-冰醋酸-高氯酸比色法，檢測波長為548nm，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得回歸方程為y=0.0068x+0.0039，相關(guān)系數(shù)為R2=0.9983。該方法具有較高的回收率，穩(wěn)定性和精密度。采用此方法可對苦丁茶三萜皂苷元含量進(jìn)行簡便快速的測定。 4.在提取苦丁茶中三萜皂苷元的工藝過程中，分別進(jìn)行了有機(jī)溶劑法，超聲波強(qiáng)化有機(jī)溶

4、劑法和酶法，通過正交試驗(yàn)確定了最佳提取工藝。結(jié)果如下，有機(jī)溶劑法：物料粒度40目，乙醇濃度95％，溫度85℃，固液比1：12，提取2次，每次2h，三萜皂苷元得率為1.06％，純度為19.2％；超聲波強(qiáng)化有機(jī)溶劑法，超聲功率175w，超聲溫度為60℃，超聲時間30min，提取次數(shù)2次，三萜皂苷元得率為1.19％，純度為17.2％；酶法：酶解pH為5.2，加酶量6mg/g，酶解溫度50℃，三萜皂苷元得率為1.36％，純度為21.3％。從結(jié)果

5、可以看出：酶法提取得率及純度均高于另外兩種方法。 5.利用超濾技術(shù)對苦丁茶提取液進(jìn)行了初步純化處理。最佳工藝條件：選擇截留分子量10000的超濾膜，壓力0.1Mpa，提取液濃度0.4mg/mL；溶液pH值為中性。該方法有效地去除了色素、大分子物質(zhì)和固體懸浮物。 6.利用不同pH條件下存在于提取液中各類物質(zhì)的溶解性差異，采用酸堿沉淀法進(jìn)一步純化三萜皂苷元，最佳工藝條件為堿化pH值為11，酸化pH值為3，稀釋倍數(shù)為1.5倍，

6、得到的富集物純度為36.2％，回收率為81.9％。 7.采用硅膠柱層析分離苦丁茶中的三萜皂苷元，通過單因素實(shí)驗(yàn)得到最佳層析條件：固定相為200-300目的硅膠，流動相為氯仿.甲醇體系，洗脫速度為1BV/h，通過柱層析，產(chǎn)品中三萜皂苷元的純度由過柱前的的36％提高到65％。 8.創(chuàng)立了高速逆流色譜純化分離苦丁茶中三萜皂苷元的工藝。選用溶劑體系為正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水=4:2:3:1，上相做固定相，下相做流動相；主機(jī)轉(zhuǎn)速