紅平菇菌絲體多糖的提取、結(jié)構(gòu)分析和抗糖尿病作用研究.pdf

1、糖尿?。―iabetes mellitus，DM）是一種全球性的內(nèi)分泌代謝疾病，表現(xiàn)在因胰島素分泌不足而引起的糖、脂肪、蛋白質(zhì)等代謝紊亂及體內(nèi)酸堿失衡，以血糖水平升高為主要特征。另外，糖尿病還經(jīng)常伴隨著諸如糖尿病腎病（Diabetic nephropathy，DN）、糖尿病肝?。―iabetic hepatopathy，DH）和糖尿病胰腺疾?。―iabetic-pancreatic disease，DPD）等并發(fā)癥的發(fā)生，致殘、致死率高

2、。目前，臨床中糖尿病的治療方法包括注射胰島素和口服降血糖藥物，但這些方法在長(zhǎng)期使用中會(huì)產(chǎn)生毒副作用，因此，尋找天然的、無(wú)毒的降血糖藥物是非常必要的。
　　紅平菇（Pleurotus djamor），又名桃紅側(cè)耳、紅側(cè)耳等，是一種食用、藥用兼有觀賞價(jià)值的珍稀蕈菌。但是目前關(guān)于紅平菇的研究較少，未見(jiàn)菌絲體多糖（Mycelia polysaccharides，MPS）的提取及抗糖尿病藥理活性的報(bào)道。
　　本課題以紅平菇為出發(fā)菌株，

3、進(jìn)行紅平菇深層液體發(fā)酵獲得菌絲體。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)（Single-factor test，SFT）和響應(yīng)面分析（Response surface methodology，RSM）等方法確定了紅平菇酸提 MPS（Acidic-extractable MPS，Ac-MPS）、堿提 MPS（Alkalic-extractable MPS，Al-MPS）和酶提MPS（Enzymatic-extractable MPS，En-MPS）的最佳提取條件

4、，并對(duì)三種紅平菇MPS的結(jié)構(gòu)和抗糖尿病及其并發(fā)癥的生理活性進(jìn)行研究，以期為從天然資源中開(kāi)發(fā)和研究新物質(zhì)提供參考，為臨床糖尿病的藥物治療提供新的線索。目前主要獲得以下研究成果。
　?。?）紅平菇MPS的提取優(yōu)化：參考現(xiàn)有的提取技術(shù)，優(yōu)化紅平菇 MPS的提取工藝。結(jié)果表明①Ac-MPS的最佳提取條件是加水倍數(shù)37.25，提取時(shí)間42.95min，HCl濃度0.20M，提取溫度83.98oC，此條件下得率為1.97％；②Al-MPS的最

5、佳提取條件是加水倍數(shù)41.56，提取時(shí)間88.91min，NaOH濃度0.36M，提取溫度74.90oC，此條件下得率為2.36%；③En-MPS的最佳提取條件是 pH值7.36，加水倍數(shù)56.78，提取時(shí)間44.77min，提取溫度35.36oC，此條件下得率為3.61%。上述提取過(guò)程中方差分析、滿(mǎn)意度分析、準(zhǔn)確度分析及異常值分析均表面模型可適用于Ac-、Al-和En-MPS工藝條件的參數(shù)優(yōu)化。
　　（2）紅平菇MPS的結(jié)構(gòu)測(cè)定

6、：①氣相色譜圖表明，Ac-MPS和Al-MPS均含有阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖，但單糖含量存在差異；En-MPS含有鼠李糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖；②液相色譜分析顯示，Ac-、Al-和En-MPS的重均分子量（Weight-average molecular weights，Mw）分別為2.33×104Da、5.26×104Da和1.97×104Da，其它分子量參數(shù)大小順序?yàn)?Al-MPS>Ac-MPS>En-MPS，多分散系數(shù) d

7、大小順序?yàn)锳l-MPS>Ac-MPS>En-MPS，表明En-MPS多糖較均一；③紅外光譜結(jié)果顯示，Ac-MPS是α-型糖苷鍵連接的呋喃糖，Al-MPS是β-型糖苷鍵連接的呋喃糖，En-MPS是β-型糖苷鍵連接的吡喃糖。
　?。?）紅平菇MPS對(duì)糖尿病小鼠氧化應(yīng)激的影響：Ac-、Al-和En-MPS均能顯著抑制鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）誘導(dǎo)的糖尿病小鼠肝臟、腎臟和胰腺中的超氧化物歧化酶（Superoxide

8、 dismutase，SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）、過(guò)氧化氫酶（Catalase，CAT）和總抗氧化能力（Total antioxidant capability，T-AOC）活性的降低及脂質(zhì)過(guò)氧化物（Lipid peroxide，LPO）和丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量的升高，表明Ac-、Al-和En-MPS具有較強(qiáng)抵制氧化應(yīng)激的活性。并且結(jié)果表明，與

9、Ac-MPS和Al-MPS相比，En-MPS表現(xiàn)出更強(qiáng)的活性。
　?。?）紅平菇MPS對(duì)糖尿病小鼠脂代謝的影響：Ac-、Al-和En-MPS能顯著抑制糖尿病小鼠血清中甘油三酯（Triacylglycerols，TG）、總膽固醇（Total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白膽固醇（Low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、極低密度脂蛋白膽固醇（Very low-density

10、lipoprotein cholesterol，VLDL-C）和動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)（Atherogenic index，AI）水平的升高和高密度脂蛋白膽固醇（High-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平的降低，表明紅平菇MPS能夠改善小鼠的脂代謝紊亂情況。
　　（5）紅平菇MPS對(duì)糖尿病小鼠器官的修復(fù)作用：Ac-、Al-和En-MPS可顯著降低小鼠血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine tr

11、ansaminase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate transaminase，AST）、尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）、肌酐（Creatinine，CRE）的水平，可顯著抑制 STZ誘導(dǎo)的器官指數(shù)的升高；小鼠肝臟、腎臟和胰腺的外觀及組織病理學(xué)切片也隨著紅平菇MPS的干預(yù)而逐漸趨于正常。并且En-MPS的作用效果要強(qiáng)于Ac-MPS和Al-MPS，說(shuō)明En-MPS有保護(hù)肝臟、腎臟和胰腺免受高血糖的影響。