

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:星形膠質細胞在創(chuàng)傷性腦損傷(traumatic braininjury,TBI)后活化并變成反應性星形膠質細胞,它們合成的膠質原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidicprotein,GFAP)增多,通過用GFAP免疫組織化學方法在灰質和白質內(nèi)可以看到星形膠質細胞肥大。星形膠質細胞伸出突起,沿著損傷邊界朝著損傷部位遷移。當這些突起遇到活化的炎性細胞和浸入的間質細胞時,它們限制炎性區(qū)域,但并不能超過損害邊界。在損
2、傷周圍,它們分泌細胞外基質(extracellular matrix,ECM)分子,用于形成基膜或重新構成膠質界膜。在遠離軸突變性的區(qū)域也可有反應性星形膠質細胞,它們與軸突、神經(jīng)元或小膠質細胞之間的細胞間通訊可以成為觸發(fā)因子。
Sir2(Silent Information Regulator2)是sirtuin(SIRT)家族最早是1984年在酵母菌中作為一個可保持染色體沉默的高度保守基因組被發(fā)現(xiàn)的。已證實在酵母菌中Sir2
3、的過表達可以通過DNA的修復延長壽命。Sirtuins歸屬于組蛋白去乙?;?(histone deacetylase,HDAC)家族。SIRT1是哺乳動物Sir2的直系同源物,它是一個細胞核蛋白并且涉及調節(jié)許多細胞內(nèi)過程,包括凋亡、細胞衰老、內(nèi)分泌信號、糖穩(wěn)態(tài)、老齡化和長壽。在人類和嚙齒類動物中,七種結構和功能不同的組蛋白去乙?;敢驯淮_定(SIRT1-SIRT7)。它們分別位于不同的亞細胞區(qū),包括細胞核、細胞質和線粒體等。SIRT1
4、去乙酰酶的活性是通過煙酰胺抑制和通過白藜蘆醇激活。此外,SIRT1蛋白活性可能是通過磷酸化作用調節(jié),因為在體外Ser27和Ser47位點可被磷酸化,然而,這些磷酸化位點的功能還沒有被確定。Sirt1可調節(jié)機體多種器官的壽命。Sirt1在胚胎腦組織中的表達水平特別高,在發(fā)育和成年哺乳動物腦組織中也有表達,提示sirt1對神經(jīng)元進化有影響。Araki等證實,在小鼠神經(jīng)細胞中,Sirt1蛋白能延緩神經(jīng)細胞軸突降解,而這種降解往往發(fā)生于接觸化學
5、藥物或從細胞體斷離的神經(jīng)細胞軸突,表明Sirt1對神經(jīng)元也有保護作用。Sirt1通過對不同刺激的調節(jié)參與眾多病理過程,如老化、代謝性疾病、神經(jīng)退行性疾病、癌癥、心血管功能障礙等,它主要存在于細胞核和細胞質中,其激活狀態(tài)可導致其亞細胞定位的轉變,其中核質穿梭非常。近期研究發(fā)現(xiàn)Sirt1是主要存在于細胞質中,而磷酸化Sirt1(p-sirt1)僅局限于核,此外,DNA損傷引起的再分配使Sirt1離開DNA損傷位點的沉默序列和基因啟動子,進而
6、改變在細胞內(nèi)的位置,這些變化可能在SIRT1的功能調節(jié)中發(fā)揮作用。
絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)是細胞內(nèi)的一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。細胞外調節(jié)激酶(extracellular signal-regulatedkinase,ERK),c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和p38信號通路是MAPKs家族中的重要成員
7、。研究證實,這些信號轉導通路存在于大多數(shù)細胞內(nèi),在將細胞外刺激信號轉導至細胞及其核內(nèi),并引起細胞生物學反應(如細胞增殖、分化、轉化及凋亡等)的過程中具有至關重要的作用。
近年來研究發(fā)現(xiàn),Sirt1的去乙酰化和MAPKs(ERK,JNK和p38)的磷酸化之間可以相互作用彼此影響,但具體機制尚未清楚,尤其是其在腦損傷后星形膠質細胞活化的作用機制更是研究甚少,因此,本課題就Sirt1和MAPKs信號通路之間相互作用對腦損傷后星形膠質
8、細胞活化表達影響的機制進行探究,為腦損傷后膠質細胞過度活化導致的神經(jīng)損傷提供新的治療靶點。
研究方法:體外實驗:取出生1-3天的小鼠乳鼠大腦皮質培養(yǎng)星形膠質細胞,免疫細胞化學熒光染色GFAP蛋白表達對培養(yǎng)的星形膠質細胞的純度進行鑒定。IL-1β刺激星形膠質細胞活化,應用Sirt1激動劑——白藜蘆醇(Resveratrol,Res),MAPK信號通路抑制劑U0126,SP600126和SB203580分別進行干預,對照組為同劑量
9、濃度的抑制劑溶劑DMSO。免疫細胞化學熒光染色對星形膠質細胞進行形態(tài)學檢測,western blot技術檢測星形膠質細胞中GFAP, Sirt1,p-ERK,p-JNK和p-p38的蛋白表達,ELISA檢測活化后星形膠質細胞中炎癥因子IL-1β,IL-6和TNFα的含量。
體內(nèi)實驗:制各小鼠黑質紋狀體通路損傷模型,側腦室給予白藜蘆醇(Resveratrol,Res),MAPK信號通路抑制劑U0126,SP600126和SB20
10、3580進行干預,對照組為同劑量濃度的溶劑DMSO。Western blot技術檢測損傷周圍組織GFAP, Sirt1和MAPK信號通路中關鍵蛋白p-ERK,p-JNK和p-p38的經(jīng)時活化表達;免疫組織化學熒光雙重染色技術檢測損傷周圍Sirt1和MAPK信號通路中關鍵蛋白p-ERK,p-JNK和p-p38在星形膠質細胞中的活化表達;ELISA檢測損傷周圍組織中炎癥因子IL-1β,IL-6和TNFα的表達量;動物行為學如平衡木實驗,抓力
11、測試,損傷后神經(jīng)功能評分等檢測損傷后給予白藜蘆醇,MAPK信號通路抑制劑U0126,SP600126和SB203580對神經(jīng)功能恢復的影響。
統(tǒng)計學分析采用GraphPad Prism5軟件進行統(tǒng)計,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準誤表示。多組間比較采用單因素方差分析,兩組間比較用Bonferroni檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
結果:體外實驗:1、western blot發(fā)現(xiàn)IL-1β刺激后星形膠質細胞GFAP蛋白表達明
12、顯增加,熒光染色顯示IL-1β刺激后星形膠質細胞中GFAP陽性表達增強且形態(tài)學有明顯改變,如胞體肥大,突起減少等符合反應性星形膠質細胞活化的特征性改變。2、活化后的星形膠質細胞中Sirt1蛋白表達明顯減少,且p-ERK,p-JNK和p-p38蛋白表達水平明顯增高。3、應用Sirt1激動劑——白藜蘆醇提高Sirt1表達,以及MAPKs信號通路抑制劑,可明顯降低星形膠質細胞GFAP水平且胞體肥大、突起縮短變粗減少的細胞形態(tài)明顯改善。4、白藜
13、蘆醇可以提高p-ERK并抑制p-JNK和p-p38蛋白的表達;抑制MAPKs信號通路活化后均可提高Sirt1蛋白的表達,且JNK信號通路抑制劑SP600125提高Sirt1蛋白表達的效果最為顯著。
體內(nèi)實驗:western blot結果顯示損傷后GFAP蛋白表達明顯增高,Sirt1蛋白表達減少,且ERK,JNK,p38信號通路均發(fā)生活化;熒光染色發(fā)現(xiàn),損傷周圍的星形膠質細胞GFAP陽性表達強烈,胞體肥大,突起縮短且減少并向損傷
14、區(qū)域聚集;白藜蘆醇可以提高Sirt1蛋白的表達,減弱損傷周圍星形膠質細胞的活化并調節(jié)ERK,JNK和p38信號通路的活化表達,其中促進ERK信號通路的活化但是抑制JNK和p38信號通路的活化;應用MAPKs抑制劑后,在減弱星形膠質細胞活化的同時可以提高Sirt1的表達,提示腦損傷后Sirt1和MAPKs信號通路活化具有一定的相互關聯(lián),此結果與體外培養(yǎng)腦皮質星形膠質細胞結果一致;ELISA檢測結果顯示損傷后IL-1β,IL-6和TNFα表
15、達量明顯增加,應用白藜蘆醇或者MAPKs信號通路抑制劑后IL-1β,IL-6和TNFα表達量明顯減少,提示提高Sirt1表達或者抑制MAPKs信號通路活化可以抑制損傷導致的炎癥因子表達;動物行為學檢測結果顯示,白藜蘆醇或者MAPKs信號通路抑制劑,均對損傷后神經(jīng)功能的恢復具有一定的促進作用。
結論:1、IL-1β可刺激體外培養(yǎng)的腦皮質星形膠質細胞活化。2、活化的星形膠質細胞Sirt1表達降低,ERK,JNK和p38信號通路發(fā)生
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- SIRT1在創(chuàng)傷性腦損傷后的功能及機制研究.pdf
- 線粒體融合蛋白-2對星形膠質細胞損傷后反應性活化的作用研究.pdf
- 淫羊藿苷對創(chuàng)傷性腦損傷的保護作用.pdf
- 抗壞血酸對創(chuàng)傷性腦損傷的保護作用.pdf
- 針刺對創(chuàng)傷性顱腦損傷大鼠TLR2-4-NFκB信號通路的影響.pdf
- APOE基因多態(tài)性影響p38MAPK信號通路介導的星形膠質細胞創(chuàng)傷后炎性損傷的實驗研究.pdf
- rhEPO對創(chuàng)傷性腦損傷保護作用的實驗研究.pdf
- EGFR-JAK1-STAT3信號通路在大鼠腦出血后星形膠質細胞活化中的作用.pdf
- 創(chuàng)傷性腦損傷后IR的研究進展.pdf
- 腦紅蛋白對創(chuàng)傷性腦損傷的保護作用研究.pdf
- 外源性bFGF對小鼠創(chuàng)傷性腦損傷后神經(jīng)再生修復作用的研究.pdf
- TLR4-MyD88-NF-κB信號通路介導外源性PACAP對大鼠創(chuàng)傷性腦損傷的保護作用.pdf
- MK-801對新生鼠創(chuàng)傷性顱腦損傷后神經(jīng)變性的影響.pdf
- Honokiol對創(chuàng)傷性腦損傷神經(jīng)保護作用的實驗研究.pdf
- 調控S1P1受體信號通路對糖氧剝后星形膠質細胞增殖的影響.pdf
- Sirt1對缺血再灌注損傷心肌的保護作用及信號通路機制研究.pdf
- SIRT1在維甲酸信號通路和干細胞分化中的作用及機制研究.pdf
- 酒精對大白鼠創(chuàng)傷性腦損傷的影響的研究.pdf
- 兒童創(chuàng)傷性腦損傷后血清皮質醇的變化及其對預后的影響.pdf
- 干預NF--κB信號通路對劃痕損傷后腦星形膠質細胞影響的實驗研究.pdf
評論
0/150
提交評論