醋酸潑尼松龍對大鼠放射性口腔黏膜炎及口腔上皮β防御素表達(dá)的影響.pdf

1、目的:1、建立大鼠放射性口腔黏膜炎模型，為進(jìn)一步研究提供動物模型基礎(chǔ)。2、利用建好的大鼠放射性口腔黏膜炎模型，研究醋酸潑尼松龍對大鼠口腔上皮中β防御素(rBD2、rBD3)及MAPKp38、NF-κBp65、IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)水平的影響，以初步探討醋酸潑尼松龍影響β防御素的可能機(jī)制。
　　方法:1、選取45只SD大鼠，隨機(jī)分為9組;其中8組為實驗組，用60 Coγ射線以35Gy劑量單次照射大鼠口鼻部;另1組為空白

2、對照組，不作處理。每天觀察大鼠舌黏膜狀況，并對拒食的大鼠進(jìn)行灌注流食喂養(yǎng)。分別于放射后1、3、5、7、10、14、21、28天處死一組實驗組大鼠，對照組于28天處死，取舌黏膜組織進(jìn)行HE染色和顯微鏡下觀察。2、選取30只SD大鼠建立放射性口腔黏膜炎模型，隨機(jī)分為醋酸潑尼松龍?zhí)幚斫M(PA組)和生理鹽水對照組（NS組）。在炎癥初始期（放射后第5天），PA組:醋酸潑尼松龍注射液局部噴灑，每次約0.1ml(0.1mg)，3次/d，共3d。NS組

3、:生理鹽水局部噴灑，每次約0.1ml(0.1mg)，3次/d，共3d。每組在用藥（或生理鹽水）結(jié)束后的第1d、4d、7d分別處死5只大鼠，處死前觀察每只大鼠的舌黏膜狀況，取舌體組織，用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測rBD2、rBD3、MAPKp38、NF-κBp65、 IL-1β、IL-6、TNF-α在上皮中的表達(dá)水平，并用IPP6.0軟件測量記錄其平均光密度值。所得數(shù)據(jù)用SPSS20.0軟件統(tǒng)計分析，各PA組和NS組的平均光密度值差異用析因設(shè)計

4、的方差分析，組間差異比較采用兩樣本t檢驗，組內(nèi)差異比較采用單因素方差分析，各檢測因子之間表達(dá)水平的關(guān)系用pearson積差相關(guān)系數(shù)表示。
　　結(jié)果:1、大鼠放射性口腔黏膜炎模型建立及觀察結(jié)果:放射后5～6天，大鼠口腔黏膜出現(xiàn)紅腫伴有小面積潰瘍;7～8天小潰瘍逐漸融合成大面積潰瘍;并持續(xù)到9～13天;14天開始，潰瘍逐漸縮小愈合;21～28天潰瘍完全愈合。HE染色顯示:放射后第5天，黏膜下層出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤，但上皮層連續(xù)完整;第

5、7、10天，上皮層崩解、脫落;第14天潰瘍底部可見新生肉芽組織及新生毛細(xì)血管;第21、28天，潰瘍處有新的上皮組織出現(xiàn)，基底層排列緊密。
　　2、醋酸潑尼松龍對放射性口腔黏膜炎及大鼠口腔上皮β防御素及部分相關(guān)因子表達(dá)水平的影響
　　2.1醋酸潑尼松龍對大鼠放射性口腔黏膜炎的影響觀察:結(jié)束用藥（或生理鹽水）的第1d，NS組中大鼠舌黏膜出現(xiàn)大面積的潰瘍;而PA組中大鼠的舌黏膜同樣出現(xiàn)了潰瘍，但面積較NS組中小。第4d，NS組中大

6、鼠舌黏膜潰瘍持續(xù);而PA組中潰瘍周圍出現(xiàn)愈合癥狀。第7d，NS組中大鼠舌黏膜潰瘍周圍出現(xiàn)愈合現(xiàn)象;而PA組中潰瘍大部分愈合。
　　2.2 rBD2的表達(dá):上皮各層細(xì)胞胞質(zhì)均可見rBD2著色。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間rBD2染色平均光密度值有顯著性差異(F=7.392，P=0.012)，同組不同時間點之間有差異(F=7.016，P=0.004)，組別和時間不存在交互效應(yīng)(F=2.312，P=0.121)。組間比較t檢驗

7、結(jié)果顯示:7d，PA組大鼠口腔上皮組織的rBD2平均光密度值顯著低于NS組(P=0.001)。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:NS組中rBD2平均光密度值隨時間先降低后升高(P=0.001)。
　　2.3 rBD3的表達(dá):上皮各層細(xì)胞胞質(zhì)均可見rBD3著色。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間rBD3染色平均光密度值有顯著性差異(F=49.586，P＜0.001)，同組不同時間點之間有差異(F=86.777，P＜0.001)，組別和時

8、間存在交互效應(yīng)(F=76.604，P＜0.001)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:4d、7d，PA組大鼠口腔上皮組織的rBD3平均光密度值顯著低于NS組(4d:P=0.007，7d: P=0.018)。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:PA組和NS組中，rBD3平均光密度值隨時間一直降低（PA組:P＜0.001，NS組:P＜0.001）。
　　2.4 MAPKp38的表達(dá):上皮各層細(xì)胞胞質(zhì)均可見MAPKp38表達(dá)。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和

9、NS組間MAPKp38染色平均光密度值差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=9.081，P=0.006)，而同組不同時間點之間也有差異(F=45.062，P＜0.001)，組別和時間存在交互效應(yīng)(F=38.152，P＜0.001)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:各時間點PA組和NS組見比較均有明顯差異;在1d，PA組較NS組的MAPKp38平均光密度值有所增高(P＜0.001);而在4d和7d，PA組的MAPKp38平均光密度值較NS組低(4d: P=0.0

10、40，7d:P＜0.001)。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:在PA組和NS組中MAPKp38平均光密度值隨時間先降低后升高（PA組:P＜0.001，NS組:P＜0.001）。
　　2.5 NF-κBp65的表達(dá):上皮各層的細(xì)胞胞核和部分胞質(zhì)均可見NF-κBp65表達(dá)。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間NF-κBp65染色平均光密度值有明顯差異(F=5.680，P=0.025)，而同組不同時間點之間有差異(F=138.259，P＜0

11、.001)，組別和時間存在交互效應(yīng)(F=41.801，P＜0.001)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:在1d，PA組蛋白平均光密度值較NS組要高(P=0.001)，而在4d和7d，PA組蛋白平均光密度值低于NS組(4d:P=0.021，7d:P＜0.001)。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:在PA組中NF-κBp65蛋白平均光密度值隨時間有降低的趨勢(P＜0.001)，而NS組中蛋白平均光密度值先降低后增高(P＜0.001)。
　　2.6 I

12、L-1β的表達(dá):上皮各層細(xì)胞胞質(zhì)均可見IL-1β表達(dá)。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間IL-1β染色平均光密度值有顯著性差異(F=5.014，P=0.035)，同組不同時間點之間有差異(F=149.023，P＜0.001)，組別和時間存在交互效應(yīng)(F=5.251，P=0.013)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:7d時間點PA組大鼠口腔上皮組織的IL-1β平均光密度值顯著低于NS組(P＜0.001)。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:IL-1β平

13、均光密度值隨時間有降低的趨勢(PA組:P＜0.001，NS組:P＜0.001)。
　　2.7 IL-6的表達(dá):上皮各層細(xì)胞胞質(zhì)均可見IL-6表達(dá)。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間IL-6染色平均光密度值有顯著性差異(F=21.821，P＜0.001)，同組不同時間點之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=1.655，P=0.212)，組別和時間存在交互效應(yīng)(F=8.831，P=0.001)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:4d、7d時間點PA組大

14、鼠口腔上皮組織的IL-6平均光密度值顯著低于NS組(4d: P=0.009，7d: P＜0.001)。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:PA組中IL-6平均光密度值隨時間有降低(P=0.002)。
　　2.8 TNF-α表達(dá):上皮各層細(xì)胞胞質(zhì)均可見TNF-α表達(dá)。析因設(shè)計方差分析顯示:PA組和NS組間TNF-α染色平均光密度值無明顯差異(F=0.989，P=0.330)，而同組不同時間點之間有差異(F=4.322，P=0.025)，組別和

15、時間不存在交互效應(yīng)(F=1.401，P=0.266)。組間比較t檢驗結(jié)果顯示:各時間點PA組和NS組見比較無明顯差異。組內(nèi)比較方差分析結(jié)果顯示:在NS組中TNF-α平均光密度值隨時間有降低的趨勢(P＜0.001)。
　　3、放射性口腔黏膜炎大鼠口腔上皮中β防御素(rBD2、rBD3)與MAPKp38、NF-κBp65及炎癥因子（IL-1β、IL-6、TNF-α)之間平均光密度的相關(guān)關(guān)系: rBD2的表達(dá)與MAPKp38(r=0.5

16、54,P=0.002)呈正相關(guān)，與NF-κ Bp65（r=0.508，P=0.004）呈正相關(guān)，與IL-1β（r=0.552，P=0.002）呈正相關(guān)，與IL-6(r=0.427，P=0.018)呈正相關(guān)，但與TNF-α間無明顯相關(guān)性（r=0.278，P=0.137）。rBD3的表達(dá)與MAPKp38間呈正相關(guān)性（r=0.554,P=0.002），與NF-κBp65（r=0.383，P=0.037）呈正相關(guān)，與IL-1β（r=0.538，

17、P=0.002）呈正相關(guān)，與IL-6(r=0.503，P=0.005)呈正相關(guān)，但與TNF-α間無明顯相關(guān)性（r=0.140,P=0.462）。
　　結(jié)論:經(jīng)60 Coγ射線照射35Gy可成功建立大鼠放射性口腔黏膜炎模型。在該模型中，醋酸潑尼松龍能減輕口腔黏膜炎的嚴(yán)重程度，降低口腔上皮中rBD2、rBD3和MAPKp38、NF-κBp65、IL-1β、IL-6的表達(dá)，MAPKp38、NF-κBp65信號通路可能在醋酸潑尼松龍對rB