KGF對口腔黏膜上皮細(xì)胞凋亡及增殖的影響.pdf

1、目的:
　　 多種口腔黏膜病的發(fā)病與細(xì)胞凋亡密切相關(guān);近來研究發(fā)現(xiàn)角質(zhì)細(xì)胞生長因子（Keratinocytegrowthfactorreceptor，KGF）不僅能特異性的促上皮細(xì)胞增殖和分化，還抑制上皮細(xì)胞的凋亡。在課題組前期對KGF的研究發(fā)現(xiàn)在口腔扁平苔蘚中KGF、KGFR及KGFmRNA的表達(dá)均較正常黏膜低，而KGF蛋白及KGFmRNA在口腔白斑中表達(dá)較正常黏膜高，推測KGF與口腔黏膜上皮細(xì)胞的增殖和凋亡有密切的聯(lián)系。

2、r>　　 本實(shí)驗(yàn)通過觀察不同濃度KGF對體外培養(yǎng)的口腔黏膜上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響，采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測上皮細(xì)胞凋亡率的改變，并應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量技術(shù)檢測KGF對上皮細(xì)胞凋亡及增殖相關(guān)基因表達(dá)的影響，探討KGF對口腔黏膜上皮細(xì)胞增殖及凋亡的作用，為進(jìn)一步探討研究KGF在口腔黏膜病發(fā)生發(fā)展中的作用提供依據(jù)，為口腔黏膜病的臨床治療提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1.體外培養(yǎng)人口腔黏膜上皮細(xì)胞，取5～10代培養(yǎng)至70～8

3、0％融合時(shí)分別加入含不同濃度KGF(0ng/ml，5ng/ml，25ng/ml，50ng/ml)的D-KFSM，將其分為對照組(KGF0ng/ml)和實(shí)驗(yàn)組(KGF5ng/ml，25ng/ml，50ng/ml)，共四組，培養(yǎng)12h、24h、48h后觀察人口腔黏膜上皮細(xì)胞形態(tài)的改變;
　　 2.培養(yǎng)48h后流式細(xì)胞儀檢測各組上皮細(xì)胞的凋亡率;
　　 3.分別培養(yǎng)12h、24h、48h后用熒光實(shí)時(shí)定量檢測各組細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)基

4、因Bcl-2、BaxmRNA的表達(dá);
　　 4.分別培養(yǎng)12h、24h、48h后用熒光實(shí)時(shí)定量檢測各組細(xì)胞內(nèi)增殖相關(guān)基因PCNAmRNA的表達(dá);
　　 5.應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對細(xì)胞凋亡率、Bcl-2、Bax、PCNAmRNA的表達(dá)數(shù)進(jìn)行分析，得出結(jié)論。
　　 結(jié)果:
　　 1.觀察細(xì)胞形態(tài):相同時(shí)間段實(shí)驗(yàn)組較對照組上皮細(xì)胞貼壁緊，遮光性明顯增強(qiáng)，培養(yǎng)48h后，實(shí)驗(yàn)3組（KGF50ng/ml）較其他組細(xì)胞核仁明

5、顯;
　　 2.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率:不同濃度KGF培養(yǎng)48h后，隨KGF濃度增加細(xì)胞的凋亡率減低(P＜0.05);
　　 3.熒光實(shí)時(shí)定量檢測對凋亡的影響結(jié)果顯示:
　　 (1)12h時(shí)實(shí)驗(yàn)1、2組較對照組上皮細(xì)胞內(nèi)Bcl-2mRNA表達(dá)無顯著差異，實(shí)驗(yàn)3組較對照組Bcl-2mRNA表達(dá)逐漸增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;
　　 (2)24h時(shí)，各實(shí)驗(yàn)組較對照組Bcl-2mRNA表達(dá)均顯著增加（

6、P＜0.05），但各實(shí)驗(yàn)組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，(P＞0.05);
　　 (3)48h時(shí)各實(shí)驗(yàn)組較對照組Bcl-2mRNA表達(dá)均顯著增加且呈劑量依賴性，(P＜0.05);
　　 (4)12h時(shí)，實(shí)驗(yàn)1、2組較對照組BaxmRNA表達(dá)無明顯差異，(P＞0.05);實(shí)驗(yàn)3組較對照組BaxmRNA表達(dá)明顯降低(P＜0.05);24h和48h時(shí)，實(shí)驗(yàn)組較對照組BaxmRNA表達(dá)逐漸降低，(P＜0.05);
　　 4.熒光實(shí)時(shí)定

7、量檢測對增殖的影響結(jié)果顯示:各時(shí)間段實(shí)驗(yàn)組較對照組比PCNAmRNA表達(dá)均增加
　　 (1)12h時(shí)，各實(shí)驗(yàn)組間PCNAmRNA表達(dá)逐漸降低，(P＜0.05);
　　 (2)24h時(shí)實(shí)驗(yàn)組較對照組PCNAmRNA表達(dá)增加，(P＜0.05)，但各實(shí)驗(yàn)組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，(P＞0.05);
　　 (3)48h時(shí)，實(shí)驗(yàn)組較對照組PCNAmRNA表達(dá)增加，且呈劑量依賴性，(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　

8、 本研究發(fā)現(xiàn)外源性KGF能使體外培養(yǎng)的口腔黏膜上皮細(xì)胞凋亡率減低;外源性KGF可上調(diào)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2mRNA的表達(dá)，下調(diào)BaxmRNA表達(dá)，并同時(shí)上調(diào)細(xì)胞增殖相關(guān)基因PCNAmRNA的表達(dá)，提示KGF通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2、BaxmRNA的表達(dá)抑制上皮細(xì)胞的凋亡，還能通過上調(diào)細(xì)胞增殖相關(guān)基因PCNAmRNA的表達(dá)促進(jìn)上皮細(xì)胞的增殖，對上皮細(xì)胞有促進(jìn)增殖和抑制凋亡的雙重作用;為進(jìn)一步探討研究KGF在口腔黏膜病發(fā)生發(fā)