古菌pfu核苷酸切除修復(fù)相關(guān)的XPB、Bax1性質(zhì)研究.pdf

1、古菌 pfu是一種耐熱古菌,常作為模式生物用于研究。核苷酸切除修復(fù)是一種修復(fù)DNA連續(xù)錯(cuò)誤的DNA修復(fù)系統(tǒng)。為了研究核苷酸切除修復(fù)相關(guān)的XPB,Bax1兩個(gè)蛋白的性質(zhì),本文克隆了相關(guān)蛋白的基因,包括 pfuXPB,pfuBax1,pfuPCNA, pfuRPA,并在大腸桿菌中進(jìn)行重組表達(dá),幾個(gè)蛋白都成功表達(dá)。經(jīng)過(guò)鎳柱純化,離子交換樹脂以及凝膠過(guò)濾純化等三步蛋白純化步驟,得到了這些蛋白的可溶形式,研究了XPB,Bax1的酶學(xué)性質(zhì)。探討了X

2、PB,Bax1參與核苷酸切除修復(fù)的可能作用機(jī)制。得到如下結(jié)果。
　　PfuXPB是人XPB的同源蛋白,能夠結(jié)合DNA,具有ATP酶活性,且它可以和pfuBax1結(jié)合形成異源二聚體,形成二聚體后,他們結(jié)合DNA的能力會(huì)增強(qiáng),同時(shí)pfuXPB的ATP酶活力也得到增強(qiáng)。作為人XPB的同源蛋白,本文并未檢測(cè)到 pfuXPB的解旋酶活性。 pfuBax1是一種古菌中特有的蛋白,它與pfuXPB在同一個(gè)操縱子序列中,兩種蛋白能互相結(jié)合,發(fā)生影

3、響。pfuBax1與pfuXPB結(jié)合后能激發(fā)pfuBax1的核酸酶活性,使它可以切割小泡DNA底物。復(fù)合物切割小泡DNA底物需要特定二價(jià)金屬離子的存在,二價(jià)金屬離子的變化會(huì)影響XPB/Bax1的切割模式,比如本文中鎂離子和錳離子條件下他們的切割模式就發(fā)生了改變。其中,在鎂離子條件下只能切割小泡DNA底物,但是在錳離子條件下不僅能夠切割小泡DNA底物,而且能切割單鏈DNA結(jié)構(gòu)。
　　為了探究XPB/Bax1切割模式,本文嘗試了不同結(jié)