微型寡核苷酸芯片檢測(cè)腦脊液病原菌的初步研究.pdf

1、　　目的:初步研究和建立微型寡核苷酸芯片快速檢測(cè)腦脊液標(biāo)本中常見病原菌的方法，為最終完善并建立腦脊液病原微生物感染寡核苷酸檢測(cè)芯片的技術(shù)路線和實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行初步探索。方法:①通過對(duì)腦脊液標(biāo)本中常見病原菌16SrRNA基因保守區(qū)的序列分析，設(shè)計(jì)通用引物(UP)，對(duì)不同細(xì)菌的DNA進(jìn)行UP-PCR擴(kuò)增，確定標(biāo)本是否有細(xì)菌感染。②用PrimerPremier軟件分別設(shè)計(jì)所有細(xì)菌的通用探針、革蘭陽性和陰性菌通用探針、腸桿菌科的屬探針、嗜血桿菌屬探

2、針、腦膜炎奈瑟菌、金黃色葡萄球菌探針、凝固酶陰性葡萄球菌探針、肺炎鏈球菌探針，及產(chǎn)單核李斯特菌探針，將探針加尾后固定于尼龍膜上，制成簡(jiǎn)易寡核苷酸芯片。⑨提取各病原體DNA后UP-PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增過程中用Bio-16-dUTP進(jìn)行標(biāo)記；將上述擴(kuò)增產(chǎn)物變性后分別與點(diǎn)有各種探針的尼龍膜反向雜交，然后用堿磷酶標(biāo)記鏈霉親合素進(jìn)行顯色。④對(duì)檢測(cè)體系的敏感性和特異性進(jìn)行了測(cè)試；⑤利用該寡核苷酸芯片檢測(cè)方法對(duì)32例經(jīng)臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)培養(yǎng)鑒定方法確定為細(xì)菌