熱休克因子1調(diào)控癌相關(guān)成纖維細(xì)胞促口腔癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制研究.pdf

1、口腔黏膜鱗癌(OSCC)是口腔頜面部常見的惡性腫瘤，局部浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是患者致死的最主要原因。研究表明腫瘤的發(fā)展除了癌細(xì)胞自身的惡性增殖以外，更是依賴于癌細(xì)胞與腫瘤微環(huán)境的相互作用，微環(huán)境與口腔癌侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)是口腔癌微環(huán)境中最主要的細(xì)胞，可通過改建腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)、誘導(dǎo)血管生成、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)、免疫抑制等直接或間接促進(jìn)口腔癌侵襲轉(zhuǎn)移。研究認(rèn)為熱休克因子1(HSF1)在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移

2、過程中發(fā)揮了核心調(diào)控作用。
　　目的:探討HSF1調(diào)控CAFs與口腔癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系
　　方法:本研究首先通過收集臨床上121例口腔癌臨床標(biāo)本，以正常黏膜為對(duì)照，對(duì)其進(jìn)行HSF1和CAFs特異性標(biāo)記物α-SMA的免疫組織化學(xué)染色，統(tǒng)計(jì)分析其與口腔癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系;其次通過體外組織塊培養(yǎng)法分離培養(yǎng)CAFs和正常成纖維細(xì)胞(NFs)，采用Real-timeRT-PCR、免疫蛋白印跡技術(shù)和免疫熒光技術(shù)對(duì)其進(jìn)行鑒定，同時(shí)采

3、用間接共培養(yǎng)、細(xì)胞劃痕和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)口腔癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響;在此基礎(chǔ)上構(gòu)建HSF1干擾載體病毒，轉(zhuǎn)染CAFs，檢測(cè)其表型的變化以及其對(duì)口腔癌侵襲轉(zhuǎn)移的影響。
　　結(jié)果:研究結(jié)果表明在121例口腔癌組織標(biāo)本中，腫瘤細(xì)胞中HSF1高表達(dá)68例(56.20％)，癌間質(zhì)成纖維細(xì)胞中HSF1高表達(dá)40例(33.06％)，α-SMA高表達(dá)80例(66.12％)。HSF1在口腔癌細(xì)胞中的表達(dá)水平與病理分級(jí)、復(fù)發(fā)和死亡正相關(guān);基質(zhì)成纖維細(xì)胞

4、中HSF1的高表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)、死亡正相關(guān);α-SMA的表達(dá)與T、N、臨床分期、病理分級(jí)、復(fù)發(fā)和死亡顯著相關(guān)。相關(guān)性分析顯示腫瘤細(xì)胞和癌間質(zhì)成纖維細(xì)胞中的HSF1和α-SMA的表達(dá)之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性，同時(shí)腫瘤細(xì)胞與癌間質(zhì)成纖維細(xì)胞中的HSF1之間也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。生存分析結(jié)果顯示腫瘤細(xì)胞及間質(zhì)成纖維細(xì)胞中HSF1、α-SMA在口腔癌中的高表達(dá)與患者的總生存期具有顯著相關(guān)性。單因素及多因素分析結(jié)果顯示癌間質(zhì)成纖維細(xì)胞中HSF1的表達(dá)與預(yù)

5、后差有顯著相關(guān)，提示其可作為口腔癌患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)。體外成功獲得口腔癌原代CAFs和NFs，兩者在基因和蛋白水平都存在明顯差異;相對(duì)于NFs，CAFs改變了口腔癌細(xì)胞Cal27的形態(tài)、遷移及侵襲能力，CAFs明顯促進(jìn)了口腔癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。組織學(xué)及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)均顯示HSF1高表達(dá)于CAFs，通過慢病毒干擾載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞，下調(diào)CAFs中HSF1的表達(dá)后，CAFs標(biāo)記物FAP、FSP-1表達(dá)下降，但α-SMA表達(dá)未見明顯變化。同時(shí)下調(diào)