癌相關(guān)成纖維細胞(CAFs)和Wnt基因?qū)θ橄侔┘毎鲋车挠绊?pdf

1、目的:探討來源于人乳腺癌相關(guān)成纖維細胞(CAFs)的Wnt基因通過Wnt信號通路對乳腺癌細胞增殖的影響。
　　方法:1、收集6例術(shù)前未進行任何治療且術(shù)后病理證實為乳腺浸潤性導管癌的女性患者的乳腺癌組織及正常組織標本。采用膠原酶消化分離法提取和培養(yǎng)CAFs、正常乳腺成纖維細胞(NBFs)。
　　2、建立Matrigel膠三維立體細胞培養(yǎng)模型—CAFs/NBFs與MCF-7體外共培養(yǎng):每個標本進行六組不同處理,每組重復3次。分為

2、對照組1(人乳腺癌細胞系MCF-7單獨培養(yǎng))、對照組2(MCF-7+NBFs共培養(yǎng)),實驗組1(MCF-7+CAFs共培養(yǎng))、實驗組2(MCF-7+CAFs+Wnt3a單克隆抗體共培養(yǎng))、實驗組3(MCF-7+CAFs+Wnt5a單克隆抗體共培養(yǎng))、實驗組4(MCF-7+CAFs+Wnt10b單克隆抗體共培養(yǎng))。其中每組上層MCF-7細胞數(shù)為5×102/2×102,下層CAFs/NBFs細胞數(shù)為1×104。利用公式—平均克隆量/接種細胞

3、量×100％計算MCF-7細胞的克隆率。
　　3、采用Transwell小室將CAFs/NBFs與MCF-7間接共培養(yǎng),每個標本進行3組不同處理,每組重復3次。分為對照組(完全培養(yǎng)基單獨培養(yǎng)MCF-7)、實驗組1(MCF-7+NBFs共培養(yǎng))、實驗組2(MCF-7+CAFs共培養(yǎng)),然后采用實時定量PCR檢測各組MCF-7中Wnt3a、Wnt5a、Wnt10b基因表達的差異。結(jié)果:Matrigel膠雙層細胞的三維立體培養(yǎng)結(jié)果:(1

4、)實驗組1中MCF-7細胞的克隆率與對照組1、對照組2相比顯著升高,說明CAFs對MCF-7的克隆有促進作用。(2)實驗組2、實驗組4的細胞克隆形成率較實驗組1均明顯降低,較對照組1、對照組2仍有升高,說明Wnt3a單抗、Wnt10b單抗對CAFs有抑制作用,但作用不完全;(3)實驗組4的細胞克隆形成率較實驗組2顯著降低,說明Wnt10b單抗對CAFs的抑制作用比Wnt3a單抗更強;(4)實驗組3與實驗組1相比,MCF-7細胞克隆率沒有

5、顯著變化,說明Wnt5a對CAFs的抑制作用不明顯。
　　采用實時熒光定量PCR檢測CAFs/NBFs與MCF-7間接共培養(yǎng)后MCF-7細胞Wnt信號轉(zhuǎn)導通路的表達,實驗組MCF-7細胞中Wnt3a、Wnt5a、Wnt10bmRNA的表達均有所上調(diào)。實驗組2中Wnt3a、Wnt10b的表達較實驗組1高,而Wnt5a的表達較實驗組1低。
　　結(jié)論:CAFs來源的Wnt3a、Wnt10b對人乳腺癌的發(fā)生有促進作用;CAFs來源的