癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)和Wnt基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的:探討來(lái)源于人乳腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)的Wnt基因通過(guò)Wnt信號(hào)通路對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響。
　　方法:1、收集6例術(shù)前未進(jìn)行任何治療且術(shù)后病理證實(shí)為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的女性患者的乳腺癌組織及正常組織標(biāo)本。采用膠原酶消化分離法提取和培養(yǎng)CAFs、正常乳腺成纖維細(xì)胞(NBFs)。
　　2、建立Matrigel膠三維立體細(xì)胞培養(yǎng)模型—CAFs/NBFs與MCF-7體外共培養(yǎng):每個(gè)標(biāo)本進(jìn)行六組不同處理,每組重復(fù)3次。分為

2、對(duì)照組1(人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7單獨(dú)培養(yǎng))、對(duì)照組2(MCF-7+NBFs共培養(yǎng)),實(shí)驗(yàn)組1(MCF-7+CAFs共培養(yǎng))、實(shí)驗(yàn)組2(MCF-7+CAFs+Wnt3a單克隆抗體共培養(yǎng))、實(shí)驗(yàn)組3(MCF-7+CAFs+Wnt5a單克隆抗體共培養(yǎng))、實(shí)驗(yàn)組4(MCF-7+CAFs+Wnt10b單克隆抗體共培養(yǎng))。其中每組上層MCF-7細(xì)胞數(shù)為5×102/2×102,下層CAFs/NBFs細(xì)胞數(shù)為1×104。利用公式—平均克隆量/接種細(xì)胞

3、量×100％計(jì)算MCF-7細(xì)胞的克隆率。
　　3、采用Transwell小室將CAFs/NBFs與MCF-7間接共培養(yǎng),每個(gè)標(biāo)本進(jìn)行3組不同處理,每組重復(fù)3次。分為對(duì)照組(完全培養(yǎng)基單獨(dú)培養(yǎng)MCF-7)、實(shí)驗(yàn)組1(MCF-7+NBFs共培養(yǎng))、實(shí)驗(yàn)組2(MCF-7+CAFs共培養(yǎng)),然后采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)各組MCF-7中Wnt3a、Wnt5a、Wnt10b基因表達(dá)的差異。結(jié)果:Matrigel膠雙層細(xì)胞的三維立體培養(yǎng)結(jié)果:(1

4、)實(shí)驗(yàn)組1中MCF-7細(xì)胞的克隆率與對(duì)照組1、對(duì)照組2相比顯著升高,說(shuō)明CAFs對(duì)MCF-7的克隆有促進(jìn)作用。(2)實(shí)驗(yàn)組2、實(shí)驗(yàn)組4的細(xì)胞克隆形成率較實(shí)驗(yàn)組1均明顯降低,較對(duì)照組1、對(duì)照組2仍有升高,說(shuō)明Wnt3a單抗、Wnt10b單抗對(duì)CAFs有抑制作用,但作用不完全;(3)實(shí)驗(yàn)組4的細(xì)胞克隆形成率較實(shí)驗(yàn)組2顯著降低,說(shuō)明Wnt10b單抗對(duì)CAFs的抑制作用比Wnt3a單抗更強(qiáng);(4)實(shí)驗(yàn)組3與實(shí)驗(yàn)組1相比,MCF-7細(xì)胞克隆率沒(méi)有

5、顯著變化,說(shuō)明Wnt5a對(duì)CAFs的抑制作用不明顯。
　　采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)CAFs/NBFs與MCF-7間接共培養(yǎng)后MCF-7細(xì)胞Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的表達(dá),實(shí)驗(yàn)組MCF-7細(xì)胞中Wnt3a、Wnt5a、Wnt10bmRNA的表達(dá)均有所上調(diào)。實(shí)驗(yàn)組2中Wnt3a、Wnt10b的表達(dá)較實(shí)驗(yàn)組1高,而Wnt5a的表達(dá)較實(shí)驗(yàn)組1低。
　　結(jié)論:CAFs來(lái)源的Wnt3a、Wnt10b對(duì)人乳腺癌的發(fā)生有促進(jìn)作用;CAFs來(lái)源的