揚州地區(qū)屠宰場、農(nóng)貿(mào)市場以及人源沙門菌分離株表型和基因型相關(guān)性研究.pdf

1、沙門菌是重要的人獸共患病原菌，長期以來對人類和動物都造成了嚴(yán)重的危害。蛋類、禽肉和豬肉一直被認(rèn)為是引起沙門菌病的三大來源。而隨著蛋雞中沙門菌防控項目的大規(guī)模開展，蛋類和禽肉中沙門菌的分離率均得到了顯著的降低。因此，豬肉及豬肉制品中沙門菌的防控已成為當(dāng)今發(fā)達(dá)國家關(guān)注的一大重點，而作為豬肉生產(chǎn)鏈中兩個最重要的環(huán)節(jié)，屠宰場的屠宰流程和農(nóng)貿(mào)市場豬肉零售點的衛(wèi)生狀況對于豬肉中沙門菌的防控有著深遠(yuǎn)的影響。本研究旨在了解揚州市屠宰場、農(nóng)貿(mào)市場豬肉以及

2、人群中沙門菌的分布狀況、血清型特點以及耐藥情況，并利用MLST、PFGE、CRISPR等分子亞分型方法對它們進(jìn)行基因分型研究，以期探明屠宰場、農(nóng)貿(mào)市場豬肉以及人來源沙門菌之間的內(nèi)在聯(lián)系并找出潛在的沙門菌傳播途徑，從而為食源性沙門菌的防控提供數(shù)據(jù)支持。
　　一、揚州地區(qū)屠宰場、農(nóng)貿(mào)市場以及人源沙門菌分離株的分離鑒定及藥物敏感性分析
　　2013年10月至2014年12月，從揚州市某屠宰場及其下游農(nóng)貿(mào)市場采集環(huán)境樣品和屠宰豬樣品

3、392份、豬肉樣品178份，分別分離出沙門菌275株和130株，分離率為70.2％(275/392)和73.0％(130/178)。從揚州市和泰州市疾病預(yù)防與控制中心收集人源沙門菌49株。三種來源的沙門菌共計454株。統(tǒng)計學(xué)分析顯示，屠宰場5次采樣沙門菌分離率之間并無顯著性差異(P＞0.05)，且沙門菌的分離情況受季節(jié)因素影響不大。血清型鑒定結(jié)果顯示，屠宰場和農(nóng)貿(mào)市場樣品中的最優(yōu)勢血清型均為德爾卑沙門菌，而在人源沙門菌中，德爾卑沙門菌位

4、居第二，其他血清型如鼠傷寒沙門菌、鴨沙門菌、倫敦沙門菌在三種來源中也較為常見。對454株三種來源的沙門菌進(jìn)行16種抗生素的藥敏實驗，結(jié)果顯示屠宰場來源的沙門菌對四環(huán)素耐藥率最高，為30.9％;而農(nóng)貿(mào)市場豬肉來源的沙門菌對萘啶酸表現(xiàn)出最高的耐藥性，達(dá)到了33.1％;人源沙門菌對氨芐西林抗性最大，為55.1％。同時，在β-內(nèi)酰胺類抗生素中，三種來源的沙門菌對青霉素類的耐藥性顯著高于頭孢菌素類(P＜0.05);而在喹諾酮類抗生素中，對萘啶酸的

5、耐藥性也顯著高于恩諾沙星、氧氟沙星等其他類抗生素（P＜0.05）。此外，三種來源的沙門菌對鏈霉素、復(fù)方新諾明等也表現(xiàn)出較高的耐藥率。鼠傷寒沙門菌、倫敦沙門菌和德爾卑沙門菌均表現(xiàn)出較高的耐藥性，其中鼠傷寒沙門菌多重耐藥最為突出。值得注意的是，1株人源印第安納沙門菌對本研究所用的16種抗生素均呈現(xiàn)耐藥。三種來源沙門菌最常見的耐藥型均為NAL，一定程度上說明了耐藥沙門菌在屠宰場、農(nóng)貿(mào)市場豬肉以及人三者之間的傳播。
　　二、揚州地區(qū)屠宰場

6、、農(nóng)貿(mào)市場以及人源沙門菌分離株的分子分型及相關(guān)性分析
　　利用多位點序列分型方法(MLST)將屠宰場（275株）、農(nóng)貿(mào)市場（130株）以及人群（49株）來源的沙門菌分離株分成了17、13和12種ST型，其中ST40均為主要ST型。屠宰場不同環(huán)節(jié)大量相同ST型的重復(fù)出現(xiàn)，說明了屠宰場中沙門菌沿屠宰線的傳播。脈沖場凝膠電泳(PFGE)將50株德爾卑沙門菌和27株鼠傷寒沙門菌分成了46和17種PFGE型。屠宰場第一次采樣過程中，胴體修飾

7、環(huán)節(jié)、開膛環(huán)節(jié)以及保定環(huán)節(jié)分離的鼠傷寒沙門菌P2-D13、P2-E13和P2-S1，它們之間的相似性均為100％，說明這3株沙門菌可能為同一個克隆，顯示沙門菌能夠在屠宰場中沿屠宰線發(fā)生水平傳播。分別來自于屠宰場、農(nóng)貿(mào)市場以及人的鼠傷寒沙門菌P4-L1、N2-J3和YZJK2-17，PFGE相似性超過90％，說明沙門菌可能通過豬肉這一媒介完成了在豬肉生產(chǎn)消費鏈中的傳播。利用規(guī)律成簇間隔的短回文重復(fù)序列(CRISPR)分型方法可將27株來自