腸道病毒71型抑制GSDMD介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡分子機(jī)制的研究.pdf

1、手足口病(Hand-foot-mouth diease，HFMD)是一種兒童常見病，可由多種病毒感染而引發(fā)，主要病原體為腸道病毒屬的柯薩奇病毒A16(CV-A16)和腸道病毒71型(EV71)。不同于CV-A16，EV71感染更易導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)并發(fā)癥，嚴(yán)重者甚至死亡。EV71自第一次在加利福尼亞被分離出，相繼在世界多地區(qū)暴發(fā)并報(bào)道，而如何防治EV71等病毒感染引起的手足口病，是一個(gè)亟待解決的公共衛(wèi)生問題。目前在臨床治療中并沒有特效藥物，

2、因此對(duì)于EV71的致病機(jī)制仍需要深入研究，尋找有效的抗病毒藥物。
　　EV71侵染宿主，經(jīng)模式識(shí)別受體識(shí)別后，將信號(hào)傳遞給下游信號(hào)通路，最終產(chǎn)生干擾素、炎性因子等，完成宿主的免疫防御過程，但同時(shí)EV71也能夠逃逸宿主的天然免疫應(yīng)答過程，而逃避天然免疫的防御在EV71感染致病過程中具有重要意義。炎癥小體作為天然免疫應(yīng)答中的重要組成部分，也在病毒感染防御中發(fā)揮舉足輕重的作用。實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，EV71感染后激活NLRP3炎癥體，炎癥

3、體在發(fā)揮防御功能的同時(shí)，EV71蛋白酶2A和3C切割炎癥小體，拮抗炎癥小體活性，影響下游炎性因子IL-1β的釋放。近期研究發(fā)現(xiàn)，NLRP3下游通路中GSDMD可被caspase-1切割，其N端片段1-275aa誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡。那么EV71感染是否可以調(diào)控GSDMD?發(fā)現(xiàn)，EV71感染RD，HeLa和THP-1細(xì)胞系均可以引起GSDMD表達(dá)的降低。3C蛋白酶能夠切割GSDMD，3C的酶活性位點(diǎn)突變則不能引起GSDMD的切割，說明3C對(duì)于GS

4、DMD的切割依賴其蛋白酶活性。通過對(duì)于GSDMD中3C可能的切割位點(diǎn)進(jìn)行突變，發(fā)現(xiàn)Q193-G194為3C的切割位點(diǎn)，切割產(chǎn)生1-193的N端片段和194-484的C端片段。對(duì)3C的切割片段進(jìn)行功能性研究，發(fā)現(xiàn)3C切割的N端片段1-193并不會(huì)誘導(dǎo)焦亡，也不會(huì)影響病毒的復(fù)制，但caspase-1切割片段1-275aa會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡并抑制病毒復(fù)制。1-275誘導(dǎo)焦亡的關(guān)鍵位點(diǎn)還不清楚，構(gòu)建了一系列突變體，發(fā)現(xiàn)第239位的蘇氨酸和第240位