腸道病毒71型疫苗免疫應答機制研究.pdf

1、目前對大多數(shù)疫苗的保護機制缺乏了解,新型疫苗的研發(fā)設計仍停留在依靠“經(jīng)驗”階段,導致疫苗研發(fā)時間長且成本高。近年來系統(tǒng)疫苗學概念的提出,為疫苗學發(fā)展開辟了新的思路。腸道病毒71型(EV71)疫苗是我國自主研發(fā)的新型疫苗,目前中國大陸3個廠家已完成的III期臨床試驗,結果顯示疫苗具有較好的安全性和保護效果,疫苗對EV71感染所致手足口病的保護率達90％以上,對EV71感染所引起相關疾病的保護率在80%以上。EV71疫苗為我國領先研發(fā)的創(chuàng)新

2、型疫苗,了解該疫苗的免疫機制對促進EV71疫苗研發(fā)具有重要意義。本研究目的是探討EV71疫苗誘導機體免疫應答機制,為EV71疫苗研發(fā)和應用提供理論基礎。
　　為了探討疫苗免疫應答的共同機制,運用薈萃分析(Meta分析)方法,分析自NCBI GEO數(shù)據(jù)庫和ArrayExpress數(shù)據(jù)庫中下載的疫苗免疫基因芯片表達譜數(shù)據(jù),分別探討疫苗免疫機體后固有免疫和獲得性免疫在轉錄水平上共同的基因和通路,并應用EV71疫苗免疫人群樣本采用RT-P

3、CR方法進行驗證。結果表明疫苗誘導固有免疫共同基因和通路為IFN-I相關的基因和通路;疫苗誘導獲得性免疫共同基因主要為EEF1A1、IL-18,通路為B細胞和T細胞受體信號激活通路。
　　在Meta分析的基礎上,為揭示EV71疫苗的免疫機制,采用基因芯片和蛋白芯片技術探討EV71疫苗免疫機制,獲得了EV71疫苗免疫人群應答的轉錄組譜和蛋白組譜。固有免疫應答轉錄組分析結果表明,IFN-I信號通路在EV71疫苗誘導的固有免疫應答中發(fā)揮

4、重要作用,應用小鼠及基因缺陷小鼠模型驗證該信號通路結果顯示, EV71疫苗誘導固有免疫應答中存在一條 TLR4→IRF9→IFN-I→Jak-STAT→免疫細胞活化調控通路?；蚺c中和抗體水平關聯(lián)性分析結果表明ELL2與中和抗體水平關聯(lián)性較高,提示該基因有可能作為預測中和抗體應答的標志物。獲得性免疫應答轉錄組分析結果表明,差異表達基因主要參與細胞因子-細胞因子相互作用、細胞粘附作用、抗原加工和提呈作用等通路;基因與中和抗體的關聯(lián)性分析表

5、明MX1和MX2與抗體持久性應答的關聯(lián)性較高,有可能作為免疫持久性預測水平的標志物。對20個基因應用 RT-PCR方法進行驗證,結果顯示芯片檢測結果可靠。應用蛋白芯片檢測獲得EV71疫苗獲得性免疫應答的蛋白組譜,差異表達上調蛋白主要為炎癥反應蛋白、趨化因子、干擾素相關蛋白和細胞間粘附分子;差異表達下調蛋白主要為免疫調節(jié)分子和炎癥前因子。蛋白因子與中和抗體水平關聯(lián)性分析得到ICAM-1和IP-10與中和抗體水平具有較高的相關性,提示 IC