烏靈菌粉抗抑郁及谷紅注射液抗腦缺血再灌注損傷的作用和機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 烏靈菌粉抗抑郁作用及機(jī)制研究
　　抑郁癥(Depression)又稱為抑郁障礙，是一種常見(jiàn)的精神障礙性疾病，其臨床表現(xiàn)有心境低落、思維遲緩、意志活動(dòng)減退、認(rèn)知功能損害和一些軀體癥狀，主要包括睡眠障礙、乏力、食欲減退、體重下降等。其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，改善抑郁癥的治療一直是包括精神科在內(nèi)的眾多學(xué)科的研究熱點(diǎn)。藥物治療是目前治療抑郁癥的主要手段，但抑郁癥是一個(gè)涉及多種機(jī)制的復(fù)雜疾病

2、，近年來(lái)抗抑郁藥物的研制雖有很大進(jìn)展，但仍缺乏理想的藥物。近年來(lái)研制的新型抗抑郁藥雖然毒性低、不良反應(yīng)少，但低應(yīng)答率及長(zhǎng)期用藥亦可能引起潛在不良反應(yīng)是面臨的主要挑戰(zhàn)。因而尚需深入研究其發(fā)病機(jī)制研究新型治療藥物。
　　烏靈參(Xylariasp)是生長(zhǎng)在土棲白蟻巢中的一種真菌的菌核，具有利尿、補(bǔ)心神、治失眠、治療吐血及產(chǎn)后失血等藥用價(jià)值。烏靈菌粉是采用深層發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)烏靈參菌絲體制成的淺棕色至棕色粉末，其膠囊制劑在臨床主要用于鎮(zhèn)靜安

3、神和抗失眠的治療。烏靈菌粉的抗抑郁、抗焦慮效果在臨床上已經(jīng)得到證實(shí)，顯示中醫(yī)藥在這方面的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。為了進(jìn)一步確立這一優(yōu)勢(shì)，仍需在作用機(jī)制方面進(jìn)行深入研究。
　　本研究建立了社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)失敗小鼠抑郁癥模型，并通過(guò)社交回避反應(yīng)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)觀察烏靈菌粉的抗抑郁作用。結(jié)果表明模型組小鼠在社交回避反應(yīng)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中的社交區(qū)停留時(shí)間比例明顯低于對(duì)照組動(dòng)物(P＜0.01)，而烏靈菌粉治療（低劑量，0.5 g/kg、中劑量，1.0 g/kg、高劑量，2.0

4、g/kg）后可以顯著提高其社交區(qū)停留時(shí)間比例(P＜0.05)。同時(shí)，模型組小鼠的角落區(qū)停留時(shí)間比例明顯高于對(duì)照組動(dòng)物(P＜0.01)，低、中、高劑量的烏靈菌粉治療后顯著降低了其角落區(qū)停留時(shí)間比例(P＜0.05)。隨后我們進(jìn)一步在分子水平上對(duì)烏靈菌粉的抗抑郁癥作用機(jī)制進(jìn)行探討。因?yàn)榻鼇?lái)有不少研究報(bào)道社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)失敗壓力會(huì)增加嚙齒類動(dòng)物大腦內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)鍵蛋白的表達(dá)，于是我們采用Western blotting和qRT-PCR對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基

5、因和蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，模型組小鼠大腦海馬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志性蛋白GRP78/Bip和PDI的表達(dá)水平升高(P＜0.05)，而烏靈菌粉治療14 d后其表達(dá)水平顯著降低(P＜0.05);與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠海馬蛋白IRE1α和基因sXBP1的表達(dá)水平顯著增加(P＜0.05)，而烏靈菌粉低、中和高劑量治療14 d后其表達(dá)水平顯著降低(P＜0.05);此外模型組小鼠海馬IRE1α的蛋白和sXBP1的基因表達(dá)水平明

6、顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，烏靈菌粉治療后其表達(dá)水平明顯降低(P＜0.05);與細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因CHOP轉(zhuǎn)錄水平在模型組小鼠海馬內(nèi)顯著升高，而B(niǎo)cl2/Bax蛋白表達(dá)水平則顯著降低(P＜0.05)，而高劑量的烏靈菌粉顯著降低其表達(dá)水平(P＜0.05)。
　　上述結(jié)果表明，烏靈菌粉能夠有效改善社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)失敗模型小鼠的抑郁癥狀，具有良好的抗抑郁作用。機(jī)制研究顯示，烏靈菌粉能夠有效維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)進(jìn)而保護(hù)細(xì)胞，恢復(fù)神經(jīng)細(xì)胞正常功

7、能。
　　第二部分 谷紅注射液抗腦缺血再灌注損傷的作用機(jī)制研究
　　腦缺血是目前全球致死率位于第二位的腦血管疾病，缺血再灌注損傷是腦缺血重要的病理生理機(jī)制之一。研究證實(shí)腦缺血再灌損傷導(dǎo)致了線粒體廣泛性的進(jìn)行性損傷，自噬是清除損傷線粒體的普遍機(jī)制，腦內(nèi)神經(jīng)元的正常生理活動(dòng)依賴于線粒體產(chǎn)生的ATP作為能量供體。故線粒體的正常功能在腦缺血的多種損傷與修復(fù)階段起到重要作用。目前臨床上腦缺血治療的方案之一是聯(lián)合使用溶栓藥物與神經(jīng)保護(hù)藥

8、物。但如何減少經(jīng)溶栓處理后的再灌注損傷已經(jīng)成為一個(gè)重要問(wèn)題。到目前為止，尚缺乏療效確切且能夠?qū)鼓X缺血再灌注損傷的藥物。
　　谷紅注射液是由乙酰谷酰胺和紅花提取液制成的復(fù)方制劑，紅花提取液含有紅花黃色素和紅花苷類等有效成分，其中羥基紅花黃色素A等對(duì)缺血性卒中的保護(hù)作用已被眾多基礎(chǔ)研究所證實(shí)。乙酰谷酰胺是谷胺酰胺乙酰基化的衍生物，研究已表明谷氨酰胺可以對(duì)抗腦缺血引起的神經(jīng)元損傷。目前已有大量的臨床應(yīng)用表明谷紅注射液對(duì)腦缺血患者具有良

9、好的療效，本實(shí)驗(yàn)室的前期研究也顯示，谷紅注射液可以顯著改善實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注損傷大鼠的運(yùn)動(dòng)功能。
　　為進(jìn)一步探討其具體作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞(middlecerebr alartery occlusion，MCAO)模型，并通過(guò)神經(jīng)缺損癥狀評(píng)分和貼紙去除實(shí)驗(yàn)對(duì)谷紅注射液的藥效學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組大鼠神經(jīng)缺損癥狀評(píng)分顯著增加(P＜0.001)，雙側(cè)前肢完全去除貼紙的時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P＜0.001)，經(jīng)過(guò)谷紅注射

10、液14 d的治療后，大鼠神經(jīng)缺損癥狀評(píng)分顯著減少且雙側(cè)前肢完全去除貼紙的時(shí)間(P＜0.05)明顯縮短。然后對(duì)大鼠大腦皮層組織線粒體自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)谷紅注射液治療14d后可有效上調(diào)Beclin1、Parkin、KIFC2和UCP3蛋白的表達(dá)(P＜0.05)。
　　綜上，本實(shí)驗(yàn)觀察到谷紅注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷有明顯的保護(hù)作用，而這一作用可能是通過(guò)對(duì)線粒體功能的保護(hù)而實(shí)現(xiàn)的。這為谷紅注射液的臨床應(yīng)用以及抗腦