丹參酮ⅡA注射液對大鼠腦缺血-再灌注損傷的防治作用.pdf

1、腦缺血/再灌注損傷(Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury，CIRI)是臨床上常見的病理過程，例如，發(fā)生在休克治療、心肺腦復(fù)蘇、腦血管栓塞再通和解除腦腫瘤壓迫之后等，嚴重威脅著患者的生命，對疾病轉(zhuǎn)歸有不良影響。目前，對腦缺血/再灌注損傷尚沒有確切的防治方法。 神經(jīng)元特異性烯醇酶(Neuron-Specific Enolase，NSE)是存在于大腦神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細胞內(nèi)參與糖酵解的特異酶，腦神經(jīng)

2、元損傷后，血清和腦脊液中NSE含量增加，其升高水平與腦損傷程度呈正相關(guān)，可作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的一個敏感性生化指標。 近年來，通過對丹參藥理作用的研究發(fā)現(xiàn)，丹參對腦缺血/再灌注損傷具有保護作用。在丹參的有效成份中，丹參酮Ⅱ A是最主要的脂溶性成份。目前關(guān)于丹參酮Ⅱ A防治腦缺血/再灌注損傷的給藥時機和給藥劑量方面的研究尚屬空白。本研究采用在缺血前和再灌注即時給予不同劑量的丹參酮Ⅱ A，觀察血中NSE的變化和腦組織形態(tài)學(xué)改變，探討

3、不同的給藥時機和給藥劑量對腦缺血/再灌注損傷的作用，為臨床治療提供實驗依據(jù)。 材料與方法： 一、動物和手術(shù)：健康雄性SD大鼠56只，體重300±25g，由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。所有實驗動物均籠養(yǎng)，任意食水，自然采光，在實驗環(huán)境中適應(yīng)3天。將實驗動物隨機分為對照組和給藥組，給藥組設(shè)定三種給藥時機(缺血前30分鐘、再灌注即時和缺血前30分鐘+再灌注即時)和四種給藥劑量(0mg/kg，3.0mg/kg，6.0mg/kg

4、，12.0mg/kg)，各實驗條件下均采用4只大鼠進行觀察。腦缺血/再灌注損傷模型采用改良四血管阻塞(4-VO)法。將大鼠置于麻醉盒中，放入裝有乙醚紗布的小燒杯作誘導(dǎo)麻醉，待其四肢癱軟后取出，用沾有乙醚的紗布放大鼠鼻孔附近維持麻醉．將大鼠俯臥位固定于手術(shù)臺上，鼠頭與軀干屈曲30°，頸后正中切口1～2cm，暴露第一頸椎兩側(cè)橫突孔，將去掉針尖的61/2號針頭在酒精燈上加熱，燒灼從橫突孔中穿行的椎動脈，使其斷開。逢合切口。再將大鼠仰臥位固定在

5、手術(shù)臺上，頸正中切口1～2cm，頸動脈三角處牽開胸鎖乳突肌，分離、暴露兩側(cè)頸總動脈，用無損傷動脈夾夾閉兩側(cè)頸總動脈，20min后解除動脈夾，開始再灌注。 模型成功標志：去除乙醚麻醉后動物仍意識喪失，翻正反射消失，口唇、雙眼球蒼白，角膜反射消失，瞳孔散大，金屬鑷刺激口唇無咬嚙活動。解除夾閉后1～2 min以上癥狀均消失。出現(xiàn)抽搐及手術(shù)過程中大出血的大鼠淘汰。 二、血清NSE濃度測定：大鼠在再灌注后24h，乙醚麻醉下取心臟血

6、2ml，靜置，離心，取血清50μl，嚴格按照大鼠NSE ELISA試劑盒使用說明操作，經(jīng)酶標儀在450nm處讀出OD值后，在繪制的標準曲線上算出對應(yīng)的血清NSE濃度(μg/L)。 三、組織學(xué)觀察：將40g/L多聚甲醛(pH 7.4)固定的鼠腦自前囟-2.3mm～6.8mm范圍內(nèi)取組織做冠狀切片，脫水，包埋，HE染色，光鏡下觀察細胞形態(tài)學(xué)改變。 四、數(shù)據(jù)分析：各組數(shù)據(jù)均以x±s表示，用Sigma Stat軟件進行隨機效應(yīng)模

7、型的析因方差分析和Dunnett檢驗。 實驗結(jié)果： 1、不同給藥時機對大鼠血清NSE濃度的影響： 0mg/kg劑量各組之間，大鼠血清NSE濃度變化沒有顯著性差異(p>0.05)。3mg/kg和6mg/kg劑量各組中，再灌注即時給藥組和缺血前30分鐘+再灌注即時給藥組分別與缺血前30分鐘給藥組相比，大鼠血清NSE濃度顯著降低(p<0.05)；而再灌注即時給藥組和缺血前30分鐘+再灌注即時給藥組之間沒有顯著性差異(P

8、>0.05)。12mg/kg劑量各組之間，大鼠血清NSE濃度變化沒有顯著性差異(p>0.05)。 2、不同給藥劑量對大鼠血清NSE濃度的影響： 0mg/kg劑量各組和對照組相比，大鼠血清NSE濃度變化沒有顯著性差異(p>0.05)。3mg/kg、6mg/kg和12mg/kg劑量各組與0mg/kg劑量各組和對照組相比，大鼠血清NSE濃度顯著降低(p<0.05)。缺血前30分鐘給藥各組中，12mg/kg劑量組與3mg/kg和

9、6mg/kg劑量組相比，大鼠血清NSE濃度顯著降低(p<0.05)。再灌注即時給藥各組和缺血前30分鐘+再灌注即時給藥各組中，不同給藥劑量組間大鼠血清NSE濃度變化沒有顯著性差異(p>0.05)。 3、大鼠海馬CA1區(qū)組織學(xué)改變： 光鏡下可見對照組和0mg/kg劑量各組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞胞體腫脹明顯，染色質(zhì)呈細顆粒狀或彌散性深染，核仁與染色質(zhì)分辨不清，細胞膜溶解，細胞質(zhì)外漏，細胞殘缺不全、數(shù)目減少、排列疏松，呈神經(jīng)

10、細胞損傷性改變。3mg/kg、6mg/kg和12mg/kg劑量各組大鼠海馬CA1區(qū)也可見神經(jīng)細胞損傷性改變，但程度較對照組和0mg/kg組輕。 討論 本實驗通過復(fù)制大鼠全腦缺血/再灌注損傷模型，并且在缺血前30分鐘、再灌注即時和缺血前30分鐘+再灌注即時分別給予0mg/kg、3mg/kg、6mg/kg和12mg/kg的丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液，觀察給藥時機和給藥劑量對腦缺血/再灌注損傷的影響。結(jié)果顯示，在上述設(shè)定的給藥時機

11、給予不同劑量的丹參酮ⅡA，均能降低大鼠腦缺血/再灌注損傷后血清NSE濃度，且光鏡下可見海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞損傷減輕，證明丹參酮ⅡA對腦缺血/再灌注損傷具有保護作用。而再灌注即時給藥和缺血前30分鐘+再灌注即時給藥的效果更為明顯。由于再灌注即時給藥和缺血前30分鐘+再灌注即時給藥的作用效果無顯著性差異，因此，在應(yīng)用丹參酮ⅡA保護腦組織，減少缺血/再灌注損傷時，不必聯(lián)合缺血前30分鐘給藥，在再灌注即時給藥即可。當給予不同劑量的丹參酮ⅡA時，

12、我們發(fā)現(xiàn)，在再灌注即時給藥或缺血前30分鐘+再灌注即時給藥時，低劑量與高劑量的作用效果相近。因此為減少藥物副作用，在應(yīng)用丹參酮IIA保護腦組織，減少缺血/再灌注損傷時，給予低劑量藥物即可達到保護作用。 結(jié)論： 1、丹參酮ⅡA對腦缺血/再灌注損傷具有保護作用。 2、在腦缺血/再灌注即時給予丹參酮ⅡA，對腦缺血/再灌注損傷的保護作用優(yōu)于腦缺血之前給藥。 3、在腦缺血/再灌注即時給予丹參酮ⅡA時，低劑量與高劑量