肺癌胸水腫瘤細胞的體外培養(yǎng)、鑒定及其對常規(guī)化療藥物敏感性研究.pdf

1、背景：
　　肺癌是全球范圍內(nèi)威脅人類生存的一大健康問題。在我國，男性患者中肺癌發(fā)病率居于所有癌癥的首位；女性患者中，僅次于乳腺癌居第2位[1]。同時，肺癌患者的死亡率居高不下，據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測，截至到2030年，全球每年將會有約250萬人死于肺癌。造成肺癌高死亡率的主要原因之一是一半以上的肺癌患者診斷時已是晚期（ⅢB期-Ⅳ期），此時，可供選擇的治療方案只有全身性化療和有限的靶向治療及免疫治療[2]。然而，在全身化療的情況下，肺癌

2、患者的五年生存率仍低于15％。這種低存活率現(xiàn)象的原因之一是因為腫瘤患者對化療藥物的敏感性不同造成的。在化療前或化療中缺乏可靠的指標(biāo)指導(dǎo)臨床醫(yī)師選擇最優(yōu)的化療藥物[3]，仍是目前肺癌治療亟待解決的問題。因此，研究一個個體化、能充分體現(xiàn)患者個體特征進而指導(dǎo)臨床化療的手段成為一種必需。
　　原代細胞培養(yǎng)是直接從機體獲取細胞、組織或器官進行體外培養(yǎng)。相對于一般研究所采用的成熟細胞系來說，原代培養(yǎng)的細胞可以更真實的反應(yīng)機體的特征、更能代表患

3、者的生物學(xué)和臨床特性[4-6]。傳統(tǒng)的肺癌原代培養(yǎng)是通過手術(shù)獲取組織標(biāo)本，采用酶消化法或組織塊培養(yǎng)發(fā)進行原代培養(yǎng)[7-10]。然而多數(shù)肺癌患者診斷是已處于肺癌晚期，失去了手術(shù)治療的機會，因此原代培養(yǎng)的組織標(biāo)本獲取受到限制。同時，組織來源的細胞進行原代培養(yǎng)時，細胞的生長環(huán)境發(fā)生較大變化，此時是否會在體外進行二次選擇有待探討。因此，組織來源的原代培養(yǎng)細胞用于檢測化療藥物敏感性的可行度尚待進一步研究確定。而本實驗嘗試對肺癌患者的腫瘤細胞進行體

4、外培養(yǎng)，考慮到多數(shù)患者診斷時已處于晚期，失去手術(shù)機會，因此選擇肺癌合并胸腔積液患者，獲取胸水中的腫瘤細胞，進行體外培養(yǎng)及鑒定，并檢測其在體外對化療藥物的敏感性，該方法簡單、安全，且更接近標(biāo)本的生長環(huán)境，有望為下一步的個體化治療提供臨床依據(jù)。
　　目的：
　　本實驗嘗試對肺癌患者的腫瘤細胞進行體外培養(yǎng)，考慮到多數(shù)患者診斷時已處于晚期，失去手術(shù)機會，因此選擇肺癌合并胸腔積液患者，分離胸腔積液中的肺癌細胞進行體外培養(yǎng)，通過免疫熒光

5、和裸鼠皮下移植瘤模型的建立鑒定體外培養(yǎng)是否成功。采用MTS比色法檢測經(jīng)過鑒定的細胞系對臨床常用化療藥物的敏感性，通過與臨床資料對比，進一步判斷其是否具有預(yù)測腫瘤藥物敏感性、指導(dǎo)臨床治療的作用。
　　方法：
　　與鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科密切配合，無菌條件下收取最終診斷為“肺癌合并胸腔積液”的患者的胸水100mL于2個50mL離心管中，30分鐘內(nèi)帶至實驗室。經(jīng)過處理后以含10%胎牛血清的DMEM/F12+GlutaMAX-

6、l(1×)培養(yǎng)基在37℃，5%CO2，5%O2三氣培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細胞傳代至20代左右時，細胞具有相似的形態(tài)特征、可以穩(wěn)定的傳代。此時通過免疫熒光（Pan-CK、TTF-1、P53、Ki67）和裸鼠皮下移植瘤的方法檢測所培養(yǎng)的細胞是否確為腫瘤細胞。對經(jīng)鑒定確定為腫瘤細胞的細胞進行體外細胞增殖能力檢測。同時采用MTS比色發(fā)測定該細胞對臨床常用化療藥物順鉑、卡鉑、培美曲塞、吉西他濱、長春瑞濱、吉非替尼敏感性進行測定，對比其與臨床實際藥物敏感

7、性是否一致。
　　結(jié)果：
　　成功分離并培養(yǎng)肺腺癌細胞系1個，經(jīng)免疫熒光和裸鼠皮下移植瘤的方法鑒定為腫瘤細胞?；熕幬锩舾行越Y(jié)果顯示該細胞系對培美曲塞、鉑類、吉非替尼均較敏感，對吉西他濱及長春瑞濱的敏感性則不及對照組。這與該患者的臨床治療效果基本一致。
　　結(jié)論：
　　胸水可以作為原代細胞培養(yǎng)的標(biāo)本來源，較易分離純化。該來源的肺癌細胞體外藥物敏感性實驗結(jié)果和臨床實際化療敏感性基本相符，有可能成為新的預(yù)測藥物敏感性