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1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文骨橋蛋白對胃癌細胞生長、侵襲以及對化療藥物敏感性的影響姓名:劉天舒申請學(xué)位級別:博士專業(yè):內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師:王吉耀20070415中文摘要骨橋蛋白對胃癌細胞生長、侵襲以及對化療藥物敏感性的影響中文摘要胃癌是常見的惡性腫瘤。在我國,胃癌的發(fā)病率在男性中為第二位,在女性為第三位。其中三分之一的胃癌在發(fā)現(xiàn)時己屬晚期,失去手術(shù)根治的機會。即使是手術(shù)根治的胃癌,60%700$發(fā)生局部復(fù)發(fā)或遠處轉(zhuǎn)移。因此化療已成為臨床上常用的治療
2、方法。但是胃癌在不同的化療方案中的有效率只有40%一5096。因此臨床上急需探索可能提高胃癌治療藥物療效的方法。骨橋蛋白(0steopontin,OPN)在文獻中被認為與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān),可能成為腫瘤治療的靶點。本研究首先檢測了在不同分化程度的胃癌細胞株中骨橋蛋白的表達,然后通過RNA干擾技術(shù)下調(diào)胃癌細胞中骨橋蛋白的表達,體外實驗觀察骨橋蛋白對胃癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力的影響,并觀察骨橋蛋白下調(diào)后胃癌細胞對化療藥物的敏感性的改
3、變,為胃癌治療尋找新的方向提供基礎(chǔ)和理論依據(jù)。一、骨橋蛋白在不同分化程度的胃癌細胞株中的表達目的:了解OPN在不同分化程度的人胃癌細胞株中的表達。方法:通過RealtimePCR和Westernblot方法從mRNA和蛋白水平撿測了三株不同分化程度的胃癌細胞株(MKN28、SGC7901和BGC823)中骨橋蛋白(OPN)的表達。結(jié)果:三株細胞的形態(tài)學(xué)顯示MKN28為高分化的胃癌細胞株。SGC7901為中分化的細胞株;BGC823為未分
4、化的細胞株;RealtimePCR的結(jié)果提示MKN28和SCrC7901兩株細胞株表達OPNmRNA,但是BGC823未能檢測出有OPN的表達;Westernblot檢測OPN蛋白在三種胃癌細胞株中的表達差異結(jié)果顯示OPN蛋白在MKN2$和SGC7901中有表達,但是在BGC823中未見表達。結(jié)論;骨橋蛋白(OPb0在胃癌細胞株MKN28和SGC7901中均有表達,但是在BGC823中無表達。二、RNA干擾下調(diào)OPN表達對胃癌細胞生長和
5、運動能力的影響目的:探討OPN下調(diào)后對胃癌細胞株MKN28和SGC7901的生物學(xué)行為的影響。方法:參考相關(guān)文獻并設(shè)計OPN的小片斷的干擾RNA,技術(shù)合成,并通過熒光標記測定兩株細胞的轉(zhuǎn)染效率;Western印跡法檢測OPN蛋白下調(diào)的情況;實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(RealtimePCR)檢測siRNA對OPNmRNA的下調(diào)率以及隨時間的變化;流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染前后細胞周期和凋亡變化;MTT法連續(xù)七天檢測腫瘤細胞在OPN有無干擾時的增殖變化
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