甘草酸或甘草次酸配伍依托泊苷對(duì)三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞作用的差異及其機(jī)制初步研究.pdf

1、目的：
　　三陰性乳腺癌的雌激素受體，孕激素受體與人表皮生長(zhǎng)因子受體2表達(dá)陰性，缺乏治療靶點(diǎn)，惡性程度高，目前臨床上缺乏有效的用藥與治療指南，治療預(yù)后較差而死亡率高。甘草酸臨床應(yīng)用廣泛，其在人體內(nèi)被代謝脫去兩分子葡萄糖成為甘草次酸。有研究表明甘草酸與甘草次酸均能抑制腫瘤生長(zhǎng)，也有報(bào)道在抗腫瘤與抗氧化方面其藥理作用相反;但兩者對(duì)三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞作用的差異以及相關(guān)藥理學(xué)機(jī)制卻未見有報(bào)道。因此，本課題考察了甘草酸和甘

2、草次酸對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響并初步探索相關(guān)的作用機(jī)制。
　　方法：
　　MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甘草酸與甘草次酸對(duì)三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞體外增殖作用不同。甘草次酸能夠抑制MDA-MB-231細(xì)胞的體外增殖;在非細(xì)胞毒濃度范圍內(nèi)（20μM以下），甘草次酸聯(lián)用抗腫瘤藥物依托泊苷可表現(xiàn)出協(xié)同作用。通過RT-PCR與Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，甘草次酸能夠調(diào)節(jié)拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα蛋白(TOPO2

3、A)的表達(dá)，該蛋白同時(shí)也是依托泊苷的作用靶點(diǎn)。非細(xì)胞毒濃度的甘草次酸對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞TOPO2A的調(diào)節(jié)作用為濃度與時(shí)間依賴性。20μM甘草次酸刺激12小時(shí)后細(xì)胞TOPO2A蛋白的表達(dá)，與對(duì)照組相比上調(diào)2.4倍，增加了依托泊苷的作用靶點(diǎn)，使藥物殺傷作用增強(qiáng)。有趣的是，刺激延長(zhǎng)至48小時(shí)時(shí)，甘草次酸反而抑制TOPO2A蛋白，其表達(dá)水平為對(duì)照組的0.5倍。同時(shí)，20μM甘草次酸能夠損耗細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽，降低細(xì)胞抵抗氧化應(yīng)激的能力，誘導(dǎo)

4、細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步增強(qiáng)了甘草次酸對(duì)依托泊苷的協(xié)同作用。另一方面，甘草酸在0-80μM范圍內(nèi)不能影響MDA-MB-231細(xì)胞的體外生長(zhǎng)也不能增強(qiáng)依托泊苷對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。與甘草次酸相反，20μM濃度以下的甘草酸不影響TOPO2A的表達(dá)以及細(xì)胞凋亡狀態(tài)，同時(shí)能降低細(xì)胞內(nèi)的活性氧，提高細(xì)胞的抗氧化能力。在細(xì)胞通路水平考察發(fā)現(xiàn)，甘草酸與甘草次酸發(fā)揮藥理學(xué)作用可能與其參與調(diào)節(jié)MAPK與AKT通路相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　甘草次酸而不是