木鱉子提取物抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖的作用及分子機(jī)制.pdf

1、目的：探討ECMS對(duì)體外培養(yǎng)的MDA-MB-231細(xì)胞增殖、凋亡及凋亡相關(guān)基因蛋白表達(dá)的影響。
　　 方法：體外培養(yǎng)MDA-MB-231細(xì)胞，選擇不同濃度含藥培養(yǎng)基與MDA-MB-231細(xì)胞共同孵育48h后，應(yīng)用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，應(yīng)用熒光顯微鏡觀察Hoechst染色后凋亡細(xì)胞形態(tài)變化，采用MTT法檢測(cè)ECMS對(duì)細(xì)胞的抑制率、PI/AnnexinV-FITC雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡、westernblot法檢測(cè)相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路以

2、及凋亡相關(guān)基因的表達(dá)。
　　 結(jié)果：經(jīng)MTT實(shí)驗(yàn)測(cè)定，ECMS各濃度對(duì)乳腺腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的增殖有顯著的抑制作用，呈良好的量效、時(shí)效關(guān)系。ECMS對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞IC50是65μg/ml在72h。我們選用了0,0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.4mg/ml四組作為本實(shí)驗(yàn)的四個(gè)劑量組，作用時(shí)間為48h。Hoechst染色后在熒光顯微鏡下可檢測(cè)到對(duì)照組正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色彌散均勻熒光，凋亡細(xì)胞的細(xì)

3、胞核會(huì)呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，甚至可見DNA熒光碎片，隨濃度增加每視野下的凋亡細(xì)胞增加。PI/AnnexinV-FITC雙染，流式細(xì)胞儀下檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，ECMS可以誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞凋亡，并隨著藥物濃度的增大，凋亡細(xì)胞的數(shù)量逐漸增加。
　　 Westernblot顯示ECMS劑量增加可下調(diào)PI3K/AKT和NF-κB信號(hào)通路的基因蛋白表達(dá)。ECMS處理MDA-MB-231細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致Cdk1和CyclinB1表