CIK對(duì)地西他濱增敏乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的殺傷機(jī)制探討.pdf

1、背景與目的：乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤。目前研究認(rèn)為表觀遺傳學(xué)的改變?nèi)缂谆?乙酰化等與原發(fā)性乳腺癌中發(fā)生的密切相關(guān)。近年來(lái),生物治療如CIK等在臨床腫瘤的治療中取得了一定的效果,然而仍然有眾多的乳腺癌患者對(duì)生物治療不敏感而導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。如何安全,有效的提高乳腺癌患者的生存質(zhì)量,延長(zhǎng)生存期,則成為生物治療的研究的熱點(diǎn)。因此,通過(guò)逆轉(zhuǎn)異常表觀遺傳學(xué)改變,去甲基化藥物與生物治療聯(lián)合使用,可能是乳腺癌患者治療的新靶點(diǎn)。為此我們探討去

2、甲基化藥物地西他濱單獨(dú)或聯(lián)合TRAIL對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞及正常乳腺M(fèi)CF-10A細(xì)胞的增殖和凋亡的影響,檢測(cè)體外培養(yǎng)CIK細(xì)胞的表型,并觀察地西他濱是否協(xié)同CIK對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷及對(duì)正常乳腺細(xì)胞的影響。
　　方法：應(yīng)用MTT方法檢測(cè)不同濃度的地西他濱應(yīng)用24,48h及TRAIL應(yīng)用24h對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞及正常乳腺M(fèi)CF-10A細(xì)胞的增殖影響;并采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)TRAIL單獨(dú)或聯(lián)合地西他濱處理乳腺癌MD

3、A-MB-231細(xì)胞及MCF-10A細(xì)胞24h后對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。從3個(gè)健康的志愿者中抽取20ml的外周血,分離PBMCs,經(jīng)加入RPMI1640,10％胎牛血清,30ng/mL IL-2,10 ng/mL IL-15單抗,在37℃5%CO2培養(yǎng),每2天半量換液,培養(yǎng)5天后流式細(xì)胞儀檢測(cè)CIK細(xì)胞表型。經(jīng)LDH釋放法檢測(cè)不同效靶比的CIK單獨(dú)或聯(lián)合50μmol/L的DAC作用24后對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞及MCF-10A細(xì)胞的殺

4、傷率。
　　結(jié)果：DAC對(duì)MDA-MB-231有輕微的細(xì)胞增殖抑制作用,對(duì)正常乳腺上皮MCF-10A無(wú)明顯的作用。MDA-MB-231細(xì)胞在不同濃度的TRAIL作用濃度下,24h的IC50為100 ng/mL,然而TRAIL對(duì)MCF-10A無(wú)殺傷效應(yīng)。MDA-MB-231細(xì)胞經(jīng)0.05、0.5、5、50μmol/L的DAC預(yù)處理24 h,聯(lián)合100ng/mL TRAIL作用24 h的凋亡率與單獨(dú)100ng/mL TRAIL組比較差

5、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或<0.01),且與DAC呈劑量依賴性(P<0.05)。正常乳腺上皮細(xì)胞MCF-10A無(wú)明顯凋亡產(chǎn)生。體外培養(yǎng)5天的CIK細(xì)胞中CD3+CD56+的NKT細(xì)胞為36.24%±3.45%,TRAIL的表達(dá)率為28.9%±9.7%。MDA-MB-231經(jīng)DAC預(yù)處理24 h后,5:1、10:1、20:1效靶比的CIK對(duì)MDA-MB-231的殺傷率分別為18.6%±2.6%、26.3%±4.5%、51.6%±6.6