二至丸配方顆粒湯劑與其傳統(tǒng)湯劑化學(xué)成分及藥效學(xué)比較研究.pdf

1、目的:
　　二至丸是經(jīng)典滋陰補腎方劑，由酒女貞子、墨旱蓮藥材組成，現(xiàn)臨床多加味治療各種疾病。而中藥配方顆粒是單味飲片提取制成的，供臨床配方用的顆粒。其沒有傳統(tǒng)湯劑中，多味藥君臣佐使共同配伍反應(yīng)，不確定其化學(xué)成分及藥效作用是否保持不變。本實驗以經(jīng)典二味方劑二至丸為研究對象，進行配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)湯劑化學(xué)成分及藥效作用比較研究。采用薄層鑒別、特征成分含量測定等分析方法，建立酒女貞子、墨旱蓮配方顆粒質(zhì)量評價方法，為其質(zhì)量標準建立提供參考

2、。考察建立二至湯特征指紋圖譜，對比研究二至湯配方顆粒湯劑與其傳統(tǒng)湯劑間的化學(xué)成分變化?？疾旖⒋笫竽I陰虛動物模型，進行二至湯及其配方顆粒湯劑給藥，考察配方顆粒湯劑改善腎陰虛作用的藥效變化。
　　方法:
　　1、酒女貞子、墨旱蓮配方顆粒質(zhì)量分析方法建立
　　參考2015版《中國藥典》及相關(guān)文獻，按照“0502薄層色譜方法”，對供試品溶液制備、點樣量、展開劑系統(tǒng)、溫濕度、不同廠家薄層板等進行細致的考察，建立酒女貞子和墨旱蓮

3、配方顆粒薄層鑒別方法。
　　采用高效液相色譜分析方法，優(yōu)化考察色譜柱、流動相、洗脫程序、柱溫、流速、進樣量等色譜條件，考察優(yōu)選最佳供試品溶液制備溶劑種類、提取方式，提取時間及料液比，采用外標法，測定酒女貞子配方顆粒中特女貞苷及墨旱蓮配方顆粒中蟛蜞菊內(nèi)酯含量，進行方法學(xué)考察驗證方法準確性。
　　2、二至丸化學(xué)成分定性定量分析
　　采用高效液相色譜分析方法，優(yōu)化考察色譜柱、流動相、洗脫梯度、柱溫、流速、進樣量等色譜條件，建

4、立二至湯特征指紋圖譜，分析對比特女貞苷與蟛蜞菊內(nèi)酯等主要化學(xué)成分含量，比較二至丸配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)湯劑間化學(xué)成分種類和含量變化。
　　3、二至丸配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)湯劑改善腎陰虛作用的藥效比較研究
　　首先對腎陰虛動物模型造模藥物劑量及造模時間進行考察，確定大鼠腎陰虛動物模型的合適造模劑量及時間。造?？疾斐晒?，進行多組造模，并同時給予二至湯及其配方顆粒湯劑不同劑量給藥，實驗過程中觀察動物體征變化，記錄計算大鼠體重、飲食飲水變

5、化。實驗結(jié)束后麻醉處死大鼠，取血取臟器，進行血清及肝臟指標測定，比較臟器指數(shù)及組織病理變化，分析不同劑型給藥改善腎陰虛作用的藥效強弱變化。
　　結(jié)果:
　　1、建立了酒女貞子、墨旱蓮配方顆粒薄層鑒別方法，供試品溶液、對照藥材及對照品在色譜圖對應(yīng)位置顯相同顏色的斑點，斑點分離清晰。所建立的薄層鑒別方法簡單方便、耐用性強，較好的適應(yīng)于酒女貞子、墨旱蓮配方顆粒薄層定性鑒別。
　　2、6批酒女貞子配方顆粒中特女貞苷含量測定結(jié)果

6、為0.271～0.609％，相差較大。7批墨旱蓮配方顆粒中蟛蜞菊內(nèi)酯含量測定結(jié)果為0.002～0.005％。方法學(xué)考察精密度、準確性、重復(fù)性、穩(wěn)定性等，均符合含量測定要求。
　　3、二至丸化學(xué)成分定性定量分析:所建立的二至湯特征指紋圖譜，各色譜峰間分離較佳，能較為全面而整體的呈現(xiàn)二至湯化學(xué)成分信息，成功匹配了特女貞苷、女貞苷、蒙花苷成分。二至湯配方顆粒湯劑對比傳統(tǒng)湯劑，化學(xué)成分種類沒有明顯差異?；谄骄迕娣e去衡量含量變化，在選定

7、的28個特征峰中，發(fā)現(xiàn)峰7、峰11、峰26和特女貞苷成分含量明顯升高，峰28成分含量是傳統(tǒng)湯劑中含量的近3倍，峰9、峰24、峰25和蒙花苷成分含量稍微升高;峰1、2、3和峰14及女貞苷成分含量明顯降低，峰5、峰15、峰20及蟛蜞菊內(nèi)酯成分含量對比傳統(tǒng)湯劑減少的更加明顯;峰19成分含量稍微降低，其余成分含量基本不變。
　　4、本研究成功建立大鼠腎陰虛模型。模型組大鼠出現(xiàn)體重明顯下降、大便干結(jié)、毛發(fā)枯槁易脫落、精神萎靡自主活能力差等體

8、征，T/E2比值減小，抗氧化酶活力增強，肝組織中MDA含量增多，大鼠臟器指數(shù)升高、臟器出現(xiàn)組織病理變化等，均提示腎陰虛模型造模成功。設(shè)計二至丸配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)湯劑不同劑量給藥，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種劑型給藥對應(yīng)濃度的中、高劑量給藥，整體上均能改善上述腎陰虛癥狀，且成劑量正相關(guān)性。不同劑型給藥間改善腎陰虛作用的藥效強弱未表現(xiàn)出明顯差異，結(jié)果顯示二至丸配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)湯劑改善腎陰虛作用藥效相近。
　　結(jié)論:
　　本實驗所建立的酒女貞子

9、、墨旱蓮薄層鑒別方法及含量測定方法，簡便快速、耐用性良好，適用于酒女貞子及墨旱蓮配方顆粒質(zhì)量控制，可以做為酒女貞子、墨旱蓮配方顆粒質(zhì)量標準建立的參考方法。建立的二至湯特征指紋圖譜，各色譜分離較佳，共選定了28個特征峰，較為全面而整體的呈現(xiàn)了二至湯化學(xué)成分信息，初步分析對比出了二至湯配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)湯劑間化學(xué)成分變化。成功建立了大鼠腎陰虛模型，通過設(shè)計二至湯配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)湯劑相同劑量給藥，分析比較兩種劑型給藥改善腎陰虛作用的藥效強弱