板藍(lán)根水提物對3T3-L1細(xì)胞分化及脂質(zhì)代謝作用的研究.pdf

1、目的:研究板藍(lán)根水提物(WEN)對小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化和脂肪代謝的作用，并探討其調(diào)控機(jī)制。
　　方法:(1)模型建立:觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程前后細(xì)胞形態(tài)變化;(2)WERI對3T3-L1前脂肪細(xì)胞活力的影響:不同濃度WERI分別作用3T3-L1前脂肪細(xì)胞24、48、72h，MTT法檢測細(xì)胞活力;(3) WERI對細(xì)胞成脂分化的作用:對3T3-L1細(xì)胞進(jìn)行脂肪分化誘導(dǎo)，誘導(dǎo)同時(shí)加入不同濃度WERI，油紅

2、O染色法檢測細(xì)胞分化程度，異丙醇溶解油紅O檢測脂類合成相對含量。(4) WERI對脂肪細(xì)胞分化過程中脂代謝和糖代謝作用:3T3-L1誘導(dǎo)分化第八天時(shí)，取細(xì)胞上清分別測定甘油三酯及葡萄糖含量;(5) WERI對脂肪細(xì)胞分化過程中基因的影響:3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)過程中加入不同濃度的WERI，在第八天提取總RNA，進(jìn)行qRT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測脂肪細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)情況;(6) WERI對脂肪細(xì)胞分化及脂肪酸、膽固醇合成通路蛋白表達(dá)影響:脂肪

3、細(xì)胞分化全過程加入不同濃度WERI進(jìn)行干預(yù)，分化第八天收集總蛋白，Western-blot法檢測脂肪細(xì)胞分化及能量代謝通路蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:(1)3T3-L1前脂肪細(xì)胞經(jīng)過誘導(dǎo)后由成纖維樣逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)閳A形或橢圓形細(xì)胞形態(tài)，并且隨著誘導(dǎo)天數(shù)的增加，細(xì)胞內(nèi)逐漸開始積累脂滴;(2) WERI在0～800mg·L-1的濃度范圍內(nèi)作用于3T3-L1前脂肪細(xì)胞24h，均對細(xì)胞有一定程度的增殖作用;作用48h后，細(xì)胞開始表現(xiàn)為增殖抑制，但

4、除了800 mg·L-1組其他仍屬于增殖作用;作用72h后，細(xì)胞活力均開始顯著下降(P＜0.01)。(3) WERI能夠明顯抑制脂肪細(xì)胞分化，并且明顯減少細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量;(4) WERI能夠明顯降低培養(yǎng)液中TG含量，并減少細(xì)胞攝取葡萄糖;(5)WERI能夠顯著下調(diào)PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c、FAS、ACC、GPDH的基因表達(dá);(6)WERI能夠顯著抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞中PPARγ、C/EBPα、FAS、FABP4、A

5、diponectin、AMPK、HMGCR及AceCS1的蛋白表達(dá)，并上調(diào)p-AMPK蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論:(1) WERI能夠有效抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞成脂分化，并能夠降低脂肪細(xì)胞脂質(zhì)合成及葡萄糖攝取。(2) WERI通過下調(diào)脂肪細(xì)胞分化轉(zhuǎn)錄因子及下游靶基因的表達(dá)從而有效抑制脂肪細(xì)胞分化及脂質(zhì)合成。(3) WERI能夠下調(diào)脂肪細(xì)胞分化途徑、脂肪酸合成及膽固醇合成途徑相關(guān)蛋白表達(dá)，增加能量代謝途徑蛋白激活從而抑制脂肪細(xì)胞分化