共軛亞油酸影響3T3-L1脂肪細(xì)胞脂質(zhì)代謝的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、共軛亞油酸(CLA)是亞油酸的立體和位置異構(gòu)體混合物的總稱，具有共軛雙烯結(jié)構(gòu)，是必需脂肪酸亞油酸的異構(gòu)體。已有的研究發(fā)現(xiàn)，CLA具有多種藥理活性，如抗癌、降低體脂沉積、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗糖尿病等作用。隨著人類基因組計(jì)劃的實(shí)施和推進(jìn)，生命科學(xué)研究已進(jìn)入后基因組時(shí)代，其主要標(biāo)志就是蛋白質(zhì)組學(xué)的興起。蛋白質(zhì)組學(xué)是研究細(xì)胞內(nèi)全部蛋白質(zhì)的組成及其活動(dòng)規(guī)律的科學(xué)，是在蛋白質(zhì)水平上定量、動(dòng)態(tài)、整體性地研究生物體，目的是從整體水平研究和分析特定生理狀態(tài)

2、下蛋白質(zhì)組成、表達(dá)水平與修飾狀態(tài)，以及蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)相互作用，了解蛋白質(zhì)整體水平與細(xì)胞功能或疾病之間關(guān)系的科學(xué)。3T3-L1細(xì)胞是目前被廣泛用于體外脂肪細(xì)胞分化研究的細(xì)胞。 本研究主要分為三大部分的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，第一步是誘導(dǎo)分化后的3T3-L1脂肪細(xì)胞分成三組，分別是空白對照組、cis—9，trans-11 CLA組和trans-10，cis-12 CLA組，用藥刺激8天后，對比觀察被CLA異構(gòu)體刺激后的3T3-L1脂肪細(xì)胞的形態(tài)；

3、第二部是為各組的脂肪細(xì)胞建立和優(yōu)化雙向電泳方法，并在雙向電泳圖上找出兩異構(gòu)體組與空白對照組相比具有表達(dá)差異的蛋白點(diǎn)；最后一步是把雙向電泳找出的差異蛋白點(diǎn)從雙向電泳膠上切下，純化后進(jìn)行LC-MS測定，將所得的LC-MS圖譜上傳至相應(yīng)的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫里搜索，確定差異蛋白。以高濃度CLA長時(shí)間處理經(jīng)誘導(dǎo)分化的3T3-L1細(xì)胞后，從細(xì)胞形態(tài)上，兩異構(gòu)體刺激的脂肪細(xì)胞都出現(xiàn)部分細(xì)胞脂肪滴變小，部分脂肪細(xì)胞皺縮，胞膜外突的現(xiàn)象。經(jīng)雙向電泳共發(fā)現(xiàn)52個(gè)

4、表達(dá)存在差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)，經(jīng)LC-MS鑒定出24個(gè)有意義的蛋白點(diǎn)，其中UCP1，UCP3，perilipin和PPARα同時(shí)被cis-9，trans-11和trans-10，cis-12CLA下調(diào)而UCP2同時(shí)被兩異構(gòu)體上調(diào)。PKA、HSL、CPT-1和TNF-α只被trans-10，cis-12 CLA上調(diào)；而AMPK僅被cis-9，trans-11上調(diào)。從上述結(jié)論可得出，cis-9，trans-11 CLA對脂肪細(xì)胞能量代謝具有促進(jìn)作