Toll樣受體信號通路關鍵基因與缺血性中風及其中醫(yī)證候易感性的關聯(lián)性研究.pdf

1、目的:
　　本研究旨在通過基因富集技術篩選出影響缺血性中風病的重要通路-Toll樣受體信號通路(Toll-like receptor signaling pathway)并對其2個關鍵基因:腫瘤壞死因子受體相關因子6(Tumor necrosis factor receptor-associated factor6，TRAF6)基因及Toll樣受體4(Toll-like receptors4，TLR4)單核苷酸多態(tài)性(Single

2、Nucleotide Polymorphisms，SNP)與缺血性中風(Ischemic Stroke，IS)及其中醫(yī)證候的相關性進行分析，此外，我們還對其關鍵基因多態(tài)性與血清血脂水平的相關性進行了分析，我們希望本研究可以為進一步研究缺血性中風的遺傳機制奠定一定的基礎，以及為揭示缺血性中風病中醫(yī)辨證分型的科學內(nèi)涵提供一定的遺傳學依據(jù)。
　　方法:
　　本研究運用遺傳流行病學的方法采用基因組富集(Gene set enrich

3、ment analysis，GSEA)等生物信息學方法篩選出符合納入排除標準的基因芯片表達譜數(shù)據(jù)，并初步篩選出在轉(zhuǎn)錄水平上影響缺血性中風的通路及基因;繼而采用病例對照研究設計，共納入缺血性中風病患者184例，對照組116例。運用Sanger基因分型技術對研究對象的外周靜脈血的TRAF6基因rs5030411、 rs5030416功能SNPs、以及TLR4基因的rs10759932、rs11536889和rs1927914多態(tài)性進行基因分

4、型檢測。使用SPSS17.0 forwindows、STATA(STATA College Station，Texas，USA)軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結果:
　　1.經(jīng)過篩查后，本研究在GEO數(shù)據(jù)庫中篩選到了1套芯片數(shù)據(jù)，即GSE16561，對此套數(shù)據(jù)直接進行基因組富集分析，得到了影響缺血性中風的關鍵通路Toll樣受體信號通路及該通路上的關鍵差異基因(TLR4、TRAF6)。
　　2.哈溫平衡(Hardy-Weinb

5、erg Equi l ibrium，HWE)檢驗:所研究的5個基因位點在對照組中的基因型分布均符合HWE平衡定律(P＞0.050)。
　　3.TRAF6基因單位點多態(tài)性與缺血性中風易感性的分析結果
　　(1) TRAF6基因的rs5030411和rs5030416多態(tài)性與缺血性中風易感性的不存在關聯(lián)，差異無統(tǒng)計學意義(均為P＞0.050)。
　　(2) TRAF6基因的rs5030411和rs5030416多態(tài)性與男性

6、、女性缺血性中風易感性的不存在關聯(lián)，差異均無統(tǒng)計學意義(均為P＞0.050)。
　　4.TLR4基因單位點多態(tài)性與缺血性中風易感性的分析結果
　　(1)對rs10759932的研究，我們發(fā)現(xiàn)其3種遺傳模型與缺血性中風易感性相關:其中，在雜合子遺傳模型(Model2:OR=0.095，95％CI:0.022-0.414，P=0.002)和純合子模型(Model2:OR=0.130，95％CI:0.029-0.581，P=0.0

7、08)其多態(tài)性與性缺血性中風的易感性相關;在隱性遺傳模型中，rs10759932多態(tài)性與性缺血性中風的易感性相關，差異有統(tǒng)計學意義(Model2:OR=9.120，95％CI:2.224-37.396，P=0.002)。
　　(2)對rs1927914分析，結果提示:純合子遺傳模型，我們發(fā)現(xiàn)rs1927914多態(tài)性與缺血性中風易感性相關(Model2:OR=0.226，95％CI:0.067-0.764，P=-0.017);而隱性

8、遺傳模型，我們發(fā)現(xiàn)rs1927914與缺血性中風易感性相關(Model1:OR=2.246，95％CI:1.214-4.158,P=0.010，Model2:OR=3.522,95％CI:1.128-10.996，P=0.030)。
　　(3) TLR4基因rs11536889多態(tài)性與缺血性中風易感性的不存在關聯(lián)，差異無統(tǒng)計學意義(均為P＞0.050)。
　　(4)在女性分層的研究中，結果示:TLR4基因rs10759932

9、多態(tài)性與女性缺血性中風的易感性相關。雜合子模型:(Model2:OR=0.024，95％CI:0.002-0.364，P=0.007);純合子遺傳模型結果為(Model2:OR=0.014，95％CI:0.001-0.234，P=0.003);此外，隱性遺傳模型中，在經(jīng)過多因素調(diào)整的的Model2中，結果示rs10759932多態(tài)性與女性缺血性中風的易感性相關（OR=52.29，95％CI:3.753-728.48，P=0.003）。<

10、br>　　(5)在女性分層的研究中，結果示:TLR4基因rs1927914多態(tài)性與女性缺血性中風的易感性相關:雜合子遺傳模型(Model2:OR=0.070，95％CI:0.006-0.865，P=0.038);純合子遺傳模型(Model2:OR=0.065，95％CI:0.007-0.630，P=0.018);此外，在隱性遺傳模型的中，我們發(fā)現(xiàn)其多態(tài)性與缺血性中風易感性相關:(OR=15.078,95％CI:1.621-140.25,

11、P=0.017)。
　　(6)在男性的分層分析中，結果示:在經(jīng)過多因素校正的顯性遺傳模型的Model2，TLR4基因rs1927914多態(tài)性與男性缺血性中風的易感性相關(OR:0.147，95％CI:0.023-0.952，P=0.044)。
　　5.Toll樣信號通路關鍵基因位點多態(tài)性與缺血性中風不同中醫(yī)證候的分析結果
　　(1)風證:在對缺血性中風風證及非風證的研究中，我們的研究結果表明:TRAF6基因rs5030

12、411、rs5030416多態(tài)性，以及TLR4基因rs10759932、rs11536889和rs1927914多態(tài)性與缺血性中風痰證易感性不存在關聯(lián)，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.050)。
　　(2)痰證:在對痰證及非痰證缺血性中風患者的分析中，研究結果表明TRAF6、TLR4基因所候選的5個基因位點多態(tài)性均與缺血性中風痰證易感性不存在關聯(lián)，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.050)。
　　(3)血瘀證:在對血瘀證及非血瘀證缺血性中

13、風患者的分析中，研究結果表明TRAF6基因rs5030411、rs5030416多態(tài)性，以及TLR4基因rs10759932、rs11536889多態(tài)性與缺血性中風痰證易感性的不存在關聯(lián)，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.050)。而在對TLR4基因rs1927914多態(tài)性的研究中，我們發(fā)現(xiàn)其顯性模型在校正性別、年齡的Model1中，其與缺血性中風痰證易感性有統(tǒng)計學意義(OR=2.182，95％CI:1.026-4.639，P=0.043)，但

14、是在多因素校正的Model2，這一統(tǒng)計學關聯(lián)則未被重復。
　　(4)氣虛證:在對氣虛與非氣虛證缺血性中風患者的研究中，我們的研究結果表明:TR AF6、TLR4基因多態(tài)性與缺血性中風氣虛證易感性的不存在關聯(lián)，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.050)。
　　6.TRAF6、TLR4基因位點多態(tài)性與缺血性中風患者血脂水平的分析結果
　　研究發(fā)現(xiàn)TLR4基因rs11536889多態(tài)性均與缺血性中風患者血清LDL水平存在關聯(lián)，差異有

15、統(tǒng)計學意義(Padj2=0.046)。
　　結論:
　　(1)Toll樣受體信號通路可能是影響缺血性中風的關鍵通路。
　　(2) TLR4基因rs10759932多態(tài)性可能與漢族人群缺血性中風有關，其A1A2和A2A2基因型可能是漢族人群缺血性中風的保護因素，可能會降低漢族人群、特別是漢族女性人群缺血性中風易感性的風險。
　　(3) TLR4基因rs1927914多態(tài)性可能與漢族人群缺血性中風有關，其A1A2和A

16、2A2基因型可能是漢族人群缺血性中風的保護因素，可能會降低漢族人群、特別是漢族女性人群缺血性中風易感性的風險;此結果在漢族男性人群同樣可以得到驗證。
　　(4) TRAF6、TLR4基因rs5030411和rs5030416多態(tài)性可能與缺血性中風風證、痰證、氣虛證、血瘀證易感性風險無關。
　　(5) TLR4基因rs10759932、rs11536889以及rs1927914多態(tài)性可能與缺血性中風風證、痰證、氣虛證、血瘀證易