枯草芽孢桿菌抑菌活性及光譜特性的研究.pdf

1、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）是目前生物防治和水果保鮮中研究最多的一種有益微生物。為了探索枯草芽孢桿菌對(duì)廣西重要的藥食兩用水果——荔枝采后病害的防治效果及其機(jī)制，本文在進(jìn)行采集、分離、篩選和鑒定的基礎(chǔ)上，對(duì)其菌株發(fā)酵液提取拮抗物質(zhì)方法、產(chǎn)拮抗物質(zhì)的發(fā)酵條件、拮抗物質(zhì)的理化性質(zhì)等方面進(jìn)行了研究；同時(shí)，為明確枯草芽孢桿菌抗菌作用的化學(xué)機(jī)制，本研究利用激光鑷子拉曼系統(tǒng)(LTRS)對(duì)芽孢桿菌、芽孢中的2，6-吡啶二羧酸及其不

2、同物理形態(tài)進(jìn)行了研究，為進(jìn)一步了解2，6-吡啶二羧酸的結(jié)構(gòu)與其在細(xì)胞芽孢的形成過程、萌發(fā)機(jī)制、抗菌物質(zhì)合成等因素之間的關(guān)系提供理論依據(jù)。
　　 本研究從健康荔枝果樹葉片及根際土壤中分離得到67株芽飽桿菌，通過篩選，獲得4株抑制荔枝病原菌活性較強(qiáng)的菌株：OR-1、OR-2、OR-3、ON-6。經(jīng)過對(duì)菌株的微生物常規(guī)鑒定及分子生物學(xué)的16SrDNA檢測，將4株菌株鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。抑菌試驗(yàn)表明

3、，4株枯草芽孢桿菌對(duì)荔枝霜疫霉、炭疽菌有明顯抑制作用，其中ON-6菌株的抑菌活性最強(qiáng)，其無菌發(fā)酵液對(duì)荔枝霜疫霉和炭疽菌菌絲生長的分別為92.3％和70.3％。荔枝離體果的抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，常溫下與4℃低溫下4株菌株的無菌發(fā)酵液對(duì)荔枝采后病原菌具有一定的抑制作用，能夠延長果實(shí)的儲(chǔ)藏時(shí)間，延緩鮮果的褐變，其中仍以O(shè)N-6菌株的防病效果最好。
　　 枯草芽抱桿菌ON-6菌株產(chǎn)拮抗物質(zhì)的最佳培養(yǎng)條件為：碳源為葡萄糖、氮源為牛肉膏和蛋白胨

4、、溫度為32-34℃、初始pH值為7.0～7.5、培養(yǎng)時(shí)間為7d、裝液量為25ml/250ml。對(duì)ON-6菌株發(fā)酵液采用濃鹽酸沉淀法及硫酸銨沉淀法，得到的提取液均有抑菌活性，表明ON-6菌株能產(chǎn)生能蛋白類和脂肽類抗生物質(zhì)。對(duì)該菌株的蛋白粗提液進(jìn)行30-60℃處理30min，其活性保持不變，121℃處理20min，活性喪失不足原有的40％；作用活性pH值在5.0-8.0范圍內(nèi)；對(duì)胰蛋白酶不敏感，對(duì)蛋白酶K和胃蛋白酶部分敏感；對(duì)紫外線不敏感