枯草芽孢桿菌發(fā)酵小米糠產(chǎn)抗氧化活性物質(zhì)的研究.pdf

1、小米糠(Millet bran)是農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物，其主要利用于家畜、家禽飼料中。小米糠含有多種營養(yǎng)因子，然而其利用率很低，不能發(fā)揮其特有的價值。目前利用微生物對農(nóng)副產(chǎn)品進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生功能性物質(zhì)是研究的熱點(diǎn)，尤其是利用枯草芽孢桿菌對農(nóng)副產(chǎn)品或農(nóng)業(yè)下腳料進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生功能性物質(zhì)，如一些功能性多肽、多糖或特殊氨基酸等。利用微生物發(fā)酵方法產(chǎn)生大量的功能性物質(zhì)，不僅能降低物質(zhì)的經(jīng)濟(jì)成本、減少對環(huán)境的污染，同時食品級菌種的發(fā)酵增加了物質(zhì)本身的安全性，減少了

2、毒副作用，可直接應(yīng)用于食品中。
　　本文通過對枯草芽孢桿菌發(fā)酵小米糠產(chǎn)抗氧化活性物質(zhì)的研究，旨在開發(fā)一種新的食品級抗氧化活性較高的混合物。主要研究結(jié)果分述如下:
　　1.小米糠產(chǎn)抗氧化能力較高的菌種的篩選。以多種枯草芽孢桿菌為起始菌株，HC值（透明圈直徑與菌落直徑比值）為初篩指標(biāo)，通過酪蛋白平板培養(yǎng)法進(jìn)行高產(chǎn)蛋白酶菌株的初步篩選。將初篩所獲得菌株在小米糠基礎(chǔ)培養(yǎng)基上進(jìn)行搖瓶復(fù)篩發(fā)酵，對其發(fā)酵上清液中總蛋白酶活力、多肽含量及總

3、抗氧化能力(T-AOC)進(jìn)行測定，進(jìn)一步篩選出適合菌株。用該菌株對小米糠進(jìn)行發(fā)酵，并對其發(fā)酵時間及上清液的抗氧化活性進(jìn)行測定。結(jié)果表明，NattoD-3為最佳發(fā)酵菌株，其蛋白酶活力為90.22 U/mL，發(fā)酵小米糠72 h時所獲得發(fā)酵液四種體外抗氧化活性相對最高，分別為T-AOC值38.04 U/mL、1，1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除力75.37％、還原力18.17％及Fe2+螯合能力44.34％。
　　2.小米糠產(chǎn)抗

4、氧化物質(zhì)發(fā)酵工藝條件優(yōu)化。以DPPH自由基清除力和多肽含量為因變量，綜合分析因子的最佳添加量范圍，并通過PB實(shí)驗(yàn)確定關(guān)鍵影響因子，然后通過響應(yīng)面設(shè)計(jì)對關(guān)鍵因子進(jìn)行優(yōu)化。綜合分析對DPPH自由基清除力和多肽含量的影響，其自變量的最佳條件為:發(fā)酵時間43.2 h，豆粕添加量5.45 g/100mL，接種量3.25％。在此條件預(yù)測DPPH自由基清除能力為91.95％。通過驗(yàn)證得出DPPH自由基清除能力為92.16％，多肽含量為12.53 mg

5、/mL。
　　3.小米糠發(fā)酵產(chǎn)物體內(nèi)外抗氧化進(jìn)行評價。首先對不同濃度樣品進(jìn)行五種抗氧化指標(biāo)的評價。發(fā)現(xiàn)同等質(zhì)量濃度下，小米糠發(fā)酵樣品(MBFDs)的DPPH自由基清除率均高于谷胱甘肽(GSH)，F(xiàn)e2+螯合能力遠(yuǎn)高于2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)和GSH;當(dāng)質(zhì)量濃度為1～5 mg/mL時，樣品T-AOC能力明顯高于GSH;在質(zhì)量濃度1～6 mg/mL范圍內(nèi)，樣品還原力均低于GSH，樣品抑制亞油酸體系中脂質(zhì)過氧化能力均高于