枯草芽孢桿菌菌株CAB-1抑菌物質的分離鑒定及活性分析.pdf

1、枯草芽孢桿菌菌株CAB-1是從黃瓜根際土壤中分離篩選到的一株生防細菌,對黃瓜白粉病、番茄灰霉病及番茄葉霉病等蔬菜病害均具有良好的防治效果。本研究對菌株CAB-1產生的三種抑菌物質:蛋白、脂肽及揮發(fā)性物質進行了分離、鑒定和分析。
　　 枯草芽孢桿菌菌株CAB-1的抑菌蛋白:采用40％飽和度硫酸銨對菌株CAB-1的發(fā)酵上清液進行鹽析,得到蛋白粗提物。該蛋白粗提物能明顯降低黃瓜白粉菌分生孢子的萌發(fā)率,并造成菌絲頂端膨大成球狀無法繼續(xù)生

2、長。子葉噴霧法測得其對黃瓜白粉病的保護作用和治療作用的防效分別為73.33％和76.85％。單因素實驗表明該蛋白粗提物的最佳產生條件為:3號培養(yǎng)基,2％接種量,培養(yǎng)溫度30℃,轉速180 r／min,裝液量100 mL／250 mL,培養(yǎng)時間48 h。該粗蛋白對胰蛋白酶及蛋白酶K不敏感,胃蛋白酶處理使其活性降低14％；抑菌蛋白在100℃以下處理30 min活性變化差異不顯著,而121℃處理30 min其抑菌活性為對照的72％；抑菌蛋白對

3、酸堿的耐受范圍廣,在pH值3-12的范圍內抑菌活性均能保持在75％以上；經甲醇、氯仿、乙酸乙酯及丙酮處理后該粗蛋白的抑菌活性變化不大。采用HiTrap DEAE-Sepharose Fast Flow陰離子交換層析柱對蛋白粗提物進行分離純化后獲得五個吸收峰,其中峰Ⅲ具有較大抑菌活性。峰Ⅲ收集液經SDS-PGAE檢測后為單一蛋白條帶,其分子量約為66 KDa,經MALDI-TOF-MS鑒定分析該蛋白與putative phage-rela

4、ted pre-neck appendageprotein匹配率最高,分值為135(P<0.05)。
　　 枯草芽孢桿菌菌株CAB-1的脂肽類抑菌物質:采用鹽酸沉淀法提取得到脂肽類物質,子葉噴霧法測得該物質對黃瓜白粉病的防效為76.17％。MALDI-TOF-MS分析結果顯示該脂肽類物質的[M+H]+值分別呈現(xiàn)1447.725,1461.813,1477.109和1500.041,1513.839,1527.566兩類信號。其中

5、1447.725,1461.813,1477.109推測為Fengycin A(C15.C17)；而在目前的報道中并沒有檢索到與1500.041,1513.839和1527.566分子量相似的脂肽類物質,推測可能是一種新的物質。
　　 枯草芽孢桿菌菌株CAB-1的揮發(fā)性抑菌物質:通過平板熏蒸法測定了菌株CAB-1所產揮發(fā)性抑菌物質(VCs)對黃瓜白粉菌的抑制作用,結果表明VCs對黃瓜白粉病的防效為85.44％。經GC-MS分析鑒