冬蟲夏草提取物對大鼠慢性肝損傷的保護作用.pdf

1、目的:本課題旨在研究TGF-β1/Smad通路在慢性肝損傷過程中的動態(tài)變化及冬蟲夏草提取物（Cordyceps mycelia extracts，CME）對慢性肝病中TGF-β1/Smad通路及肝星狀細胞(Hepatic stellatecells，HSC)的影響。
　　方法:
　　1.168只SD雄性大鼠分為4組:對照組，模型組，CME組，溶媒組。模型組給予10mg/kg二乙基亞硝胺灌胃（5次/周）至14周，15-16周不

2、做處理;對照組給予與模型組相同容量的生理鹽水至14周，15-16周不做處理;CME組給予與模型組相同的處理并在4周末開始給予80mg/kg CME至16周;溶媒組給予與模型組相同的處理并在4周末開始給予與CME相同容量的溶媒至16周。
　　2.分別在肝炎、肝纖維化、肝硬化及肝癌階段處死大鼠，取肝組織進行HE及Masson染色鑒定肝損傷模型是否成功，眼眶取血測定肝功能指標ALT及AST含量。
　　3.改良Nycodenz法分離

3、原代大鼠HSC，并提取肝組織及HSC總RNA及總蛋白，RT-PCR及實時熒光定量RT-PCR法分別檢測肝組織與HSC中α-SMA，TGF-β1，Smad3，Smad7 mRNA表達，Western Blot檢測肝組織中Smad3，Smad7蛋白表達。
　　結(jié)果:
　　1.肝組織HE，Masson染色Scheuer法評分結(jié)果均示造模4，8，12，16周肝臟分別處于肝炎階段，肝纖維化階段，肝硬化階段，早期肝癌階段;細胞免疫組化法

4、測定HSC標志物α-SMA呈陽性，熒光顯微鏡下觀察HSC其可發(fā)出易淬滅的藍綠色熒光，純度達90％以上。
　　2.模型組中肝組織及HSC中α-SMA，TGF-β1，Smad3，Smad7表達均呈動態(tài)變化。
　　(1)肝組織及HSC中α-SMA mRNA在造模4，8，12，16周表達量均顯著高于對照組，肝組織α-SMA mRNA表達量在12、16周表達最高，HSC中α-SMA mRNA表達量在12周最高。
　　(2)肝組織

5、與HSC中TGF-β1 mRNA表達不一致:肝組織TGF-β1在造模4，8，12周表達量均顯著高于對照組，且在第8周表達最高，但在造模16周TGF-β1表達量與對照組無顯著差異，并顯著低于12周模型組;HSC中TGF-β1表達量在造模4，8，12，16周均顯著高于對照組，且在8周表達最高。
　　(3)肝組織與HSC中Smad3表達趨勢基本一致:肝組織Smad3mRNA及蛋白表達量在造模4，8，12周均顯著高于對照組，在第8周最高;

6、然而肝組織Smad3 mRNA及蛋白在16周表達不一致:Smad3mRNA表達在16周顯著高于對照組，而Smad3蛋白在16周表達量與對照組相比無顯著差異;HSC中Smad3 mRNA表達在造模4，8，16周均顯著高于對照組，但在造模12周與對照組無顯著差異。
　　(4)肝組織與HSC中Smad7mRNA及蛋白表達在造模4，8，12周表達一致，與對照組相比無顯著差異，但在造模16周肝組織Smad7mRNA及蛋白顯著高于對照組，而H

7、SC中Smad7mRNA表達顯著低于對照組。
　　3.CME可顯著延緩大鼠慢性肝損傷的發(fā)展進程。
　　(1)各項檢測指標均顯示溶媒組與模型組無顯著差異。
　　(2) CME組中ALT及AST水平顯著低于模型組，HE染色及Masson染色評分證實CME在各時間點肝臟的炎癥活動度，膠原沉積度和肝細胞損傷程度均比同期模型組低。
　　(3)與模型組相比較，CME可在8周末降低肝組織中α-SMA，TGF-β1，Smad3及

8、HSC中α-SMA，Smad3的表達，同時可上調(diào)肝組織及HSC中Smad7的表達。CME可在12周末降低肝組織中α-SMA，TGF-β1，Smad3及HSC中α-SMA的表達。CME可在16周末降低肝組織α-SMA的表達，并上調(diào)HSC中Smad7的表達。
　　結(jié)論:
　　1.HSC中TGF-β1，Smad3表達升高及Smad7低表達水平可能與HSC的激活相關(guān);肝組織中TGF-β1、 Smad3表達升高，Smad7低表達水平及