黃芩提取物對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與的小鼠酒精性肝損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是否參與酒精性肝病的病理生理過程。通過測定黃芩提取物（Scutellaria radix extract,SRE）對急性酒精性肝損傷小鼠作用的有關(guān)因子，初步探討該提取物的護(hù)肝作用及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與機(jī)制，為臨床尋找理想的保肝藥物提供實驗和理論依據(jù)。
　　方法：
　　高效液相法鑒定黃芩提取物中有效成分黃芩苷的含量
　　酒精誘導(dǎo)

2、肝損傷動物模型的建立及藥物干預(yù)雄昆明小鼠60只，分為6組：正常組、模型組、硫普羅寧陽性對照組(30mg/kg)、SRE干預(yù)組（40、80及160mg/kg)，10只一組。硫普羅寧和 SRE均混懸于0.5％的羧甲基纖維素鈉(Sodium carboxymethyl cellulose,CMC-Na)溶劑，以每天灌胃的方式給藥。上午9時，藥物干預(yù)組小鼠分別以30mg/kg的硫普羅寧以及40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg的SRE

3、灌胃，其它組給予0.5%CMC-Na灌胃，均每天1次。除正常小鼠予蒸餾水，剩余小鼠均在每日下午3點(diǎn)用50%的酒精10ml/kg灌胃1次，連續(xù)14 d。
　　衣霉素誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激動物模型的建立及藥物干預(yù)雄昆明小鼠70只，分為7組：正常組，二甲基亞砜（Dimethyl sulfoxide,DMSO）對照組，模型組，硫普羅寧陽性藥組(30mg/kg)，SRE干預(yù)組（40、80及160mg/kg)，一組10只。衣霉素溶于DMSO,其它藥物

4、均混懸于0.5%CMC-Na，以每天灌胃的方式給藥。上午9時，藥物干預(yù)組小鼠分別以40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg的SRE以及30mg/kg的硫普羅寧灌胃，其它組給予0.5%CMC-Na灌胃，每天1次，連續(xù)14d。在第14天下午3點(diǎn)，除正常組蒸餾水灌胃，溶媒對照組予相應(yīng)體積0.5%DMSO灌胃外，其余各組均用1mg/kg衣霉素灌胃。
　　末次灌胃16h（禁食非限制飲水）后，摘眼球法取血，檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(a

5、lanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase,AST）及甘油三酯（triglyceride,TG）的含量；采用酶聯(lián)接免疫吸附劑測定法(enzyme-linked immunosorbent assay,Elisa)檢測血清中葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)的含量。剖取小鼠肝臟，計算肝臟指數(shù)；取肝左

6、葉，制備10%肝勻漿，測定肝組織中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、還原型谷胱甘肽(Glutathione, GSH)的含量。選取肝右葉，制備切片（5μm厚），采用蘇木素-伊紅(Hematoxylin and eosin,HE)染色，探察肝臟病理損傷。免疫組化法查看肝臟組織內(nèi)GRP78的分布情況。末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的三磷酸脫氧尿甘缺口標(biāo)記法(TdT-mediated dUTP-biotin nick end lab

7、eling,TUNEL)觀察小鼠凋亡肝細(xì)胞數(shù)。
　　結(jié)果：
　　1.高效液相法鑒定得出黃芩提取取物中有效成分黃芩苷的含量是31.2%。
　　2.相對正常鼠，酒精模型小鼠除肝內(nèi)GSH活性降低外，肝指數(shù)、血清ALT、AST及TG，肝組織MDA數(shù)值均增大顯著(P<0.01)。
　　3.與正常組比較，酒精模型組小鼠肝細(xì)胞脂肪空泡，將細(xì)胞核擠壓至一邊，伴有不同程度地中性粒細(xì)胞浸潤，并可見點(diǎn)、碎片狀壞死。
　　4.通過

8、 Elisa法和免疫組化技術(shù)測定GRP78在小鼠血清和肝臟中的濃度和分布：相對正常對照組，酒精模型組小鼠血清中的GRP78的含量明顯升高（P<0.01），肝組織內(nèi)出現(xiàn)明顯的GRP78黃棕色特染。
　　5.采用TUNEL技術(shù)觀察小鼠肝細(xì)胞凋亡：與正常組相比，酒精模型組小鼠肝細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯增多。
　　6.在酒精誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠和衣霉素誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激小鼠中均可發(fā)現(xiàn)黃芩提取物能顯著減低兩個模型組中肝功能和血脂水平，修復(fù)病理損