日本七鰓鰻CD45基因克隆,信息學(xué)分析及抗原刺激后表達(dá)差異.pdf

1、CD45是廣泛表達(dá)在有核造血干細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白,也稱之為白細(xì)胞表面共同抗原,其胞漿內(nèi)存在著具有蛋白酪氨酸磷酸酶活性的結(jié)構(gòu),可通過改變Src家族蛋白酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)從而調(diào)節(jié)蛋白酪氨酸激酶的活性,在淋巴細(xì)胞的增殖、成熟、分化、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞粘附等過程中發(fā)揮作用。此外,編碼其胞外部分的外顯子的選擇性剪切形成的變構(gòu)體依據(jù)淋巴細(xì)胞不同發(fā)育階段、活化狀態(tài)的差異選擇性表達(dá)在細(xì)胞表面,為劃分淋巴細(xì)胞的不同分化時(shí)期起到了重要的標(biāo)記作用。目前,利用C

2、D45分子及其變構(gòu)體的在造血細(xì)胞上表達(dá)的差異作為研究免疫系統(tǒng)疾病的切入點(diǎn),在疾病的預(yù)防、早期診斷、治療等方面已取得了一定的進(jìn)展。但是,在低等脊椎動物中有關(guān)于CD45基因的基礎(chǔ)研究還未深入展開。
　　 日本七鰓鰻是現(xiàn)存最古老的無頜類脊椎動物之一,是無脊椎動物向脊椎動物進(jìn)化過程中的重要的橋梁。將七鰓鰻作為研究脊椎動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)演化的模式動物,對于揭示脊椎動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的起源和進(jìn)化具有深遠(yuǎn)的意義。CD45是重要的免疫因子,它通

3、過調(diào)節(jié)蛋白激酶的活性從而在適應(yīng)性免疫系統(tǒng)應(yīng)答過程中發(fā)揮重要的作用。
　　 本文對日本七鰓鰻的白細(xì)胞cDNA文庫中搜索后發(fā)現(xiàn)一條有意義的CD45 EST序列,經(jīng)過與其他物種的CD45比對后發(fā)現(xiàn)它們胞漿內(nèi)結(jié)構(gòu)存在著較高的同源性。隨后,從基因的保守區(qū)域開始自行設(shè)計(jì)引物,通過使用3'RACE和RT-PCR的方法,最終成功地克隆到CD45基因的cDNA全長。
　　 為了探尋與日本七鰓鰻中類淋巴細(xì)胞增殖、成熟、分化相關(guān)的免疫組織。我

4、們利用實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測了不同抗原刺激前后五個(gè)組織器官CD45基因表達(dá)水平的變化。在使用LPS、ConA抗原刺激日本七鰓鰻后,在五個(gè)被檢測的組織器官中,基因表達(dá)量都有不同程度的上調(diào),其中基因表達(dá)量變化明顯的組織器官是鰓、心臟、白細(xì)胞。分析后得知,而基因表達(dá)量的上調(diào)可能暗示著這些組織與日本七鰓鰻的類淋巴細(xì)胞的增殖、分化過程密切相關(guān)。此外,還利用生物信息技術(shù)對其理化性質(zhì),蛋白質(zhì)高級結(jié)構(gòu)、物種間基因同源性、基因系統(tǒng)發(fā)生樹等方面進(jìn)行了分析