日本七鰓鰻Fyn-like的基因編碼區(qū)克隆、重組表達以及相關免疫學研究.pdf

1、Fyn基因是非受體型酪氨酸蛋白激酶Src家族成員之一，在細胞的生長、生存、凋亡、細胞與細胞之間的粘附以及免疫應答作用方面起到十分重要的作用。七鰓鰻是具有很高研究價值的模式生物，因為它是在進化上連接脊椎動物和無脊椎動物的最原始的無頜類脊椎動物。同時，它不僅有固有免疫系統，還具有適應性免疫系統。在目前的研究中，對七鰓鰻的免疫系統的研究一直是當今的熱點。
　　本研究在七鰓鰻中首次發(fā)現了Fyn-like基因，并對Fyn-like基因的cD

2、NA進行了克隆。Fyn-like的ORF區(qū)全長1611bp，編碼537個氨基酸，3'UTR區(qū)1424bp。通過blast序列比對分析發(fā)現，它與SRC家族的成員（Yes、Src和Fyn）的同源性都很高。為了說明Fyn-like基因的進化關系，從基因數據庫中找出從無頜類到哺乳類動物的Fyn、Yes和Src基因序列進行系譜分析，進一步證實了所克隆得到的基因序列為Fyn-like。目前為止，發(fā)現Fyn-like基因從無頜類中首次被發(fā)現。對其保守

3、性進行分析，結果表明Fyn-like基因同樣包含了三個保守結構域，分別為Src同源結構域3(SH3)、Src同源結構域2(SH2)和激酶結構域(PKc)。通過實時定量PCR和免疫印跡實驗分別從基因水平和蛋白水平來檢測Fyn-like在七鰓鰻各個組織（白細胞、脂肪體、鰓、腎、心）中的表達，結果發(fā)現，用混合菌刺激后，發(fā)現在腮組織和白細胞中表達量明顯上調，這個結果說明，酪氨酸蛋白激酶Fyn很可能參與免疫應答。免疫熒光實驗發(fā)現，Fyn-like