日本七鰓鰻Fyn-like的基因編碼區(qū)克隆、重組表達(dá)以及相關(guān)免疫學(xué)研究.pdf

1、Fyn基因是非受體型酪氨酸蛋白激酶Src家族成員之一，在細(xì)胞的生長、生存、凋亡、細(xì)胞與細(xì)胞之間的粘附以及免疫應(yīng)答作用方面起到十分重要的作用。七鰓鰻是具有很高研究價(jià)值的模式生物，因?yàn)樗窃谶M(jìn)化上連接脊椎動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物的最原始的無頜類脊椎動(dòng)物。同時(shí)，它不僅有固有免疫系統(tǒng)，還具有適應(yīng)性免疫系統(tǒng)。在目前的研究中，對(duì)七鰓鰻的免疫系統(tǒng)的研究一直是當(dāng)今的熱點(diǎn)。
　　本研究在七鰓鰻中首次發(fā)現(xiàn)了Fyn-like基因，并對(duì)Fyn-like基因的cD

2、NA進(jìn)行了克隆。Fyn-like的ORF區(qū)全長1611bp，編碼537個(gè)氨基酸，3'UTR區(qū)1424bp。通過blast序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，它與SRC家族的成員（Yes、Src和Fyn）的同源性都很高。為了說明Fyn-like基因的進(jìn)化關(guān)系，從基因數(shù)據(jù)庫中找出從無頜類到哺乳類動(dòng)物的Fyn、Yes和Src基因序列進(jìn)行系譜分析，進(jìn)一步證實(shí)了所克隆得到的基因序列為Fyn-like。目前為止，發(fā)現(xiàn)Fyn-like基因從無頜類中首次被發(fā)現(xiàn)。對(duì)其保守

3、性進(jìn)行分析，結(jié)果表明Fyn-like基因同樣包含了三個(gè)保守結(jié)構(gòu)域，分別為Src同源結(jié)構(gòu)域3(SH3)、Src同源結(jié)構(gòu)域2(SH2)和激酶結(jié)構(gòu)域(PKc)。通過實(shí)時(shí)定量PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)分別從基因水平和蛋白水平來檢測Fyn-like在七鰓鰻各個(gè)組織（白細(xì)胞、脂肪體、鰓、腎、心）中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用混合菌刺激后，發(fā)現(xiàn)在腮組織和白細(xì)胞中表達(dá)量明顯上調(diào)，這個(gè)結(jié)果說明，酪氨酸蛋白激酶Fyn很可能參與免疫應(yīng)答。免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)yn-like