bcl-2基因修飾雪旺細胞蛛網膜下腔移植修復大鼠脊髓損傷.pdf

1、目的:探討bcl-2基因轉染雪旺細胞蛛網膜下腔移植對脊髓損傷大鼠損傷神經功能恢復的影響。方法:體外培養(yǎng)大鼠雪旺細胞，經Ad-EGFP為載體介導端B淋巴細胞瘤-2基因(bcl-2)基因轉染雪旺細胞，分為3組:對照組、陰性轉染組及bcl-2轉染組。Western blot檢測雪旺細胞被轉染后第3天和第14天的bcl-2蛋白的表達。選取成年雌性SD大鼠83只，成功造模72只，隨機分為對照組，SCs組及bcl-2-SCs組，每組24只。依據(jù)改良

2、Allen打擊法建造大鼠急性脊髓損傷模型，分別于造模前、造模后1天、3天、1周、2周、3周、4周進行BBB、斜板試驗及改良Tarlov方法對各組大鼠進行運動功能評定。造模后7天通過RT-PCR及Western blot檢測檢測脊髓損傷區(qū)周圍膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)、神經絲蛋白（NF-200）的表達，采用TUNEL法檢測神經細胞凋亡情況，造模后4周取材行病理切片HE染色及熒光顯微鏡觀測EGFP標記的SCs存活及分布情況，HRP逆行示

3、蹤檢測神經纖維修復情況，通過SEP和MEP觀察大鼠神經電生理恢復情況。結果:Western blot結果顯示Ad-EGFP介導的bcl-2基因轉染大鼠雪旺細胞體外能穩(wěn)定表達bcl-2;大鼠下肢運動功能評價bcl-2-SCs組優(yōu)于SCs組，SCs組優(yōu)于對照組。造模完成72h，bcl-2-SCs組細胞凋亡數(shù)均明顯低于其他兩組(P＜0.05)。造模后7天，與對照組和SCs組相比，bcl-2-SCs組GFAP、NF-200基因和蛋白的表達均較顯

4、著升高P＜0.05）。造模后4周，HE染色對照組可見脊髓組織缺失及脊髓空洞形成，無神經軸索通過。SCs組損傷區(qū)可見少量神經軸索樣結構，脊髓空洞較小，bcl-2-SCs組可見較多神經軸索樣結構，未見脊髓空洞。EGFP標記的陽性細胞數(shù):bcl-2-SCs組多于SCs組，對照組數(shù)量最少，各組數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。HRP陽性神經纖維數(shù):bcl-2-SCs組＞SCs組＞對照組，各組之間有顯著性(P＜0.05)。造模后4周，SEP和ME