大黃附子加味方緩解急性胰腺炎的機(jī)制研究.pdf

1、背景:急性胰腺炎(Acute pancreatitis，AP)是多種病因?qū)е乱让冈谝认賰?nèi)異常激活，引起胰腺組織自身消化、水腫、出血甚至壞死的炎癥反應(yīng)。臨床出現(xiàn)急性上腹痛、惡心、嘔吐、發(fā)熱和血胰酶增高等。病變程度輕重不等，輕者以胰腺水腫為主，稱為輕癥急性胰腺炎;少數(shù)重者胰腺出血壞死，稱為重癥急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis，SAP)。AP作為臨床上常見的急腹癥，20％～30％會發(fā)展為SAP，SAP病情極為兇險

2、，且發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，通常伴隨全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)及全身多器官功能不全(MODS)，臨床現(xiàn)階段尚無有效的治療此病的方法。因此，深入研究AP的發(fā)病機(jī)制及相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制，為該病尋求新的有效的診斷及治療靶點(diǎn)，成為現(xiàn)階段的研究熱點(diǎn)。大黃附子細(xì)辛湯（大黃附子湯）出自《金匱要略》，具有溫散寒凝以開閉結(jié)，通下積滯以暢腸胃之效;現(xiàn)代研究表明，大黃附子湯能有效阻滯消化酶及各種炎癥因子從腺泡細(xì)胞釋放，從而腺泡細(xì)胞得到保護(hù)，中醫(yī)學(xué)上常用該方來治療SAP等

3、急危重癥。本研究旨在探求急性胰腺炎可能的發(fā)病機(jī)制，同時也為治療（重癥）急性胰腺炎提供新的思路及新的干預(yù)靶點(diǎn)。
　　目的:探討CCN1對急性胰腺炎小鼠病情發(fā)展的影響及其調(diào)控靶點(diǎn);探求大黃附子加味方(Dahuang Fuzi Jia Wei Decoction，DHFZD)對重癥急性胰腺炎小鼠的保護(hù)作用及其相關(guān)作用機(jī)制;
　　方法:腹腔注射雨蛙肽構(gòu)造小鼠AP模型;腹腔注射雨蛙肽+脂多糖(Lipopolysaccharide，LP

4、S)構(gòu)造小鼠SAP模型;眼眶靜脈注射腺病毒構(gòu)造過表達(dá)CCN1基因小鼠模型;用灌胃法給小鼠灌注大黃附子加味方湯劑;生化方法分別測定各組小鼠血清淀粉酶值;觀察評判并統(tǒng)計各組小鼠胰腺組織的病理情況;采用實(shí)時定量PCR儀(Real time quantitative PCR，RT-PCR)檢測各組小鼠胰腺組織及肝臟組織CCN1及相關(guān)炎癥基因的表達(dá)情況:通過Western Blot法檢測小鼠胰腺組織及肝臟組織中CCN1蛋白的表達(dá)量;通過免疫組化法

5、觀察統(tǒng)計胰腺組織中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的滲出情況，并觀察CCN1蛋白的表達(dá)部位;
　　結(jié)果:1.AP組小鼠血清淀粉酶值較對照組小鼠相比明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);AP組小鼠胰腺組織病理改變（水腫、腺泡壞死、炎癥浸潤及空泡形成）較對照組而言明顯加重，差異均具統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);過表達(dá)組小鼠血清淀粉酶值較空載體組小鼠相比降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);過表達(dá)組相比較空載體組而言，病理改變（水腫、腺泡壞死、

6、炎癥浸潤）減輕，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);AP組小鼠較對照組小鼠相比，胰腺中CCN1基因及蛋白的表達(dá)量顯著降低，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);過表達(dá)組小鼠肝臟組織、胰腺組織中CCN1基因表達(dá)量顯著高于空載體組，胰腺組織中CCN1蛋白表達(dá)量也顯著高于空載體組，且差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);CCN1蛋白主要表達(dá)于小鼠胰腺腺泡細(xì)胞的胞漿內(nèi);與空載體組相比，過表達(dá)組小鼠胰腺組織炎癥的減輕表現(xiàn)在中性粒細(xì)胞滲出的減少，而

7、非巨噬細(xì)胞。
　　2.DHFZD組小鼠血清淀粉酶值較SAP組小鼠相當(dāng)，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.8486);DHFZD組小鼠胰腺組織的病理改變（水腫、腺泡壞死、炎癥浸潤、空泡形成情況）均較SAP組小鼠好轉(zhuǎn)，差異均具統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而出血情況則無明顯改善;DHFZD組小鼠胰腺內(nèi)CCN1基因及蛋白的表達(dá)量較SAP組明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);DHFZD組小鼠胰腺組織的IL-1β mRNA、TNF-a

8、mRNA表達(dá)量較SAP組降低，而IL-10mRNA表達(dá)量較SAP組升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與SAP組相比，DHFZD組小鼠胰腺組織炎癥的減輕表現(xiàn)在中性粒細(xì)胞滲出的減少，而非巨噬細(xì)胞。
　　結(jié)論:CCN1可以通過減少中性粒細(xì)胞的浸潤進(jìn)而減輕小鼠胰腺組織的炎癥反應(yīng)，這可能是減輕其炎癥反應(yīng)的機(jī)制之一，有望為臨床治療急性胰腺炎提供新的視野和思路;大黃附子加味方也會通過減輕小鼠胰腺組織內(nèi)的炎癥反應(yīng)來發(fā)揮對小鼠的保護(hù)作用，而