大黃素對重癥急性胰腺炎腸動力障礙的保護作用機制研究.pdf

1、 目的：本實驗通過建立重癥急性胰腺炎大鼠模型,檢測胰腺及小腸平滑肌細胞形態(tài)學(xué)指標(biāo)、小腸推動力率及小腸平滑肌細胞凋亡,探討大黃素對大鼠重癥急性胰腺炎腸動力障礙的保護作用及其機制。方法：將45只雄性SD大鼠隨機分為重癥急性胰腺炎模型組(SAP組)、大黃素治療組(大黃素組)和假手術(shù)組(SO組),每組15只。SAP組和大黃素組均采用胰腺被膜下均勻注射3.8%?；悄懰徕c溶液制備大鼠重癥急性胰腺炎模型,SO 組開腹后僅翻動胰腺。大黃素組在造模后距

2、幽門10cm處小腸穿刺注射大黃素溶液(0.5ml/100g,濃度 5mg/ml),SAP組和SO組在造模后距幽門10cm處小腸穿刺注射生理鹽水(0.5ml/100g)。各組動物于造模48小時后亞甲藍-甲基纖維素灌胃30分鐘后檢測小腸推動率；處死大鼠取胰腺組織包埋、切片,染色作病理組織學(xué)檢查；小腸組織戊二醛固定后電子顯微鏡觀察超微結(jié)構(gòu)變化；取小腸組織包埋、切片后TUNEL法檢測細胞凋亡、免疫組織化學(xué)法檢測細胞色素C；取小腸組織,機械分離粘

3、膜層、粘膜下層及漿膜層取平滑肌組織制備單細胞懸液檢測線粒體膜電位。所得計量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x ±S)表示,采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行單因素方差分析,組間多重比較采用LSD法,檢驗水準(zhǔn)α=0.05,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：1、大鼠小腸推動率結(jié)果顯示SAP組小腸推動率較大黃素組及SO組明顯下降(P<0.05),大黃素組小腸推動率明顯高于SAP組,差異顯著(P<0.05)。2、SO組大鼠開腹后無紅色腹水、胰腺無

4、壞死、出血；SAP組大鼠開腹后肉眼可見大量血腹水,腸腔積氣明顯,胰腺組織明顯壞死、出血,大網(wǎng)膜可見出血及壞死灶；大黃素組大鼠開腹后可見少許淡紅色腹水,腸腔積氣較SAP組明顯減輕,胰腺組織壞死、出血較SAP組減輕。胰腺組織病理評分提示SAP組與SO組、大黃素組病理評分有顯著差異(P<0.001),大黃素組在病理評分上明顯低于SAP組(P<0.001)。3、小腸平滑肌細胞超微結(jié)構(gòu)提示SAP組小腸平滑肌細胞線粒體明顯減少、水腫、破裂；大黃素組

5、小腸平滑肌細胞線粒體減少不明顯、輕度水腫；SO 組小腸平滑肌細胞超微結(jié)構(gòu)基本正常.4、小腸平滑肌細胞凋亡及細胞色素C結(jié)果均顯示SAP組陽性表達程度較SO組顯著升高(P<0.001),而大黃素組陽性表達程度較SAP組明顯降低(P<0.05)。5、小腸平滑肌細胞線粒體膜電位結(jié)果顯示SAP組線粒體膜電位(綠色熒光強度：5.07±0.92)明顯低于SO組(綠色熒光強度：2.40±0.5),大黃素組線粒體膜電位(綠色熒光強度：3.28±0.28)