三氧化二砷對人子宮肉瘤MES-SA細(xì)胞系裸鼠皮下移植瘤的作用研究.pdf

1、目的：采用體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究的方法，選用人子宮肉瘤MES-SA細(xì)胞系，建立人子宮肉瘤裸鼠皮下移植瘤模型，研究三氧化二砷（Arsenic Trioxide，As2O3）對人子宮肉瘤細(xì)胞系（MES-SA）是否具有抗腫瘤作用并初步研究其可能機(jī)制。
　　方法：人子宮肉瘤細(xì)胞株MES-SA在含體積分?jǐn)?shù)0.10標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的RPM I-1640培養(yǎng)液中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，并獲取單細(xì)胞懸液；實(shí)驗(yàn)動物為40只4-6周齡的裸鼠，MES-SA單細(xì)胞懸液皮下注入裸

2、鼠體內(nèi)，產(chǎn)生瘤結(jié)節(jié)，建立人子宮肉瘤細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型。隨機(jī)分為5組：As2O3低、中、高劑量組(劑量分別為1.0、2.5、5.0mg/kg)、生理鹽水（NS）空白對照組、異環(huán)磷酰胺(IFO)陽性對照組，每組8只，連續(xù)10天腹腔注射相應(yīng)藥物，觀察裸鼠一般情況及瘤結(jié)節(jié)生長情況。停藥后處死裸鼠剝離瘤組織，檢測以下指標(biāo)：稱瘤質(zhì)量并計(jì)算抑瘤率；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率；提取瘤組織中RNA，采用熒光標(biāo)記的特異性Taq探針法，進(jìn)行PCR反應(yīng)，測定

3、CT值，進(jìn)行半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase3)基因表達(dá)的相對定量分析，檢測并比較caspase-3基因表達(dá)；制備腫瘤組織石蠟切片，進(jìn)行p-ERK抗體免疫組化染色，觀察著色情況，測定p-ERK表達(dá)（免疫組化SP法）。進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：1.一般情況：所有裸鼠均有瘤結(jié)節(jié)長出，成功建立移植瘤模型。用藥后各As2O3組裸鼠一般狀態(tài)良好，精神飲食可、大小便正常、正?；顒印⑸L良好、無明顯消瘦，與NS組差別不大；IFO陽

4、性對照組裸鼠用藥后一般狀態(tài)不佳，出現(xiàn)坐立不安等疑似腹膜刺激癥狀，且精神差，飲食少，反應(yīng)遲鈍，活動少，并有腹瀉，消瘦等。
　　2.移植瘤質(zhì)量及抑瘤率：三組As2O3組及IFO組的瘤質(zhì)量均小于NS組瘤質(zhì)量，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（P＜0.05）；As2O3高劑量組及IFO組瘤質(zhì)量最低，較其他組有顯著差異（P＜0.05）；As2O3高劑量組與IFO組瘤質(zhì)量差別不大，As2O3中、低劑量組差別也不明顯。結(jié)果提示As2O3有抑制腫瘤作用，且高

5、劑量As2O3與IFO有相似的抑瘤作用，抑瘤作用最強(qiáng)。
　　3.凋亡率：三組As2O3組及IFO組均有典型凋亡峰出現(xiàn)；與NS組相比，As2O3組及IFO組凋亡率均升高；且As2O3組凋亡率高于IFO組（P＜0.05）。As2O3組凋亡率隨劑量增加而升高，中、低劑量組差別不明顯(P＞0.05)，高劑量組凋亡率高于中、低劑量組?？梢夾s2O3能促進(jìn)細(xì)胞凋亡，且高劑量As2O3組促凋亡作用最明顯。
　　4.caspase-3基因表

6、達(dá)：各 As2O3組 caspase-3基因表達(dá)高于 NS組及 IFO組（P＜0.05)，提示As2O3可上調(diào)caspase-3基因表達(dá)；高劑量As2O3組表達(dá)高于中、低劑量組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.192）。
　　5.p-ERK表達(dá)：各劑量As2O3組及IFO組p-ERK的表達(dá)均低于NS組，但無顯著差異；高劑量As2O3組p-ERK表達(dá)率最低，NS組最高，高劑量As2O3組顯著低于NS組(Z=-2.063，P=0.039＜

7、0.05)。提示As2O3可下調(diào)p-ERK的表達(dá)，且高劑量組作用最明顯。
　　結(jié)論：1.As2O3對人子宮肉瘤裸鼠皮下移植瘤增殖發(fā)揮出較好的抑制生長作用，能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；As2O3可上調(diào)Caspase-3、下調(diào)p-ERK基因的表達(dá)；促凋亡可能與上調(diào)Caspase-3基因表達(dá)有關(guān)，抑瘤作用還可能與下調(diào)p-ERK表達(dá)影響ERK-MAPK信號傳導(dǎo)通路有關(guān)。2.與IFO相比，As2O3不良反應(yīng)相對較小，耐受可，相對安全有效，有望應(yīng)用于