布比卡因神經(jīng)毒性大鼠海馬基因表達譜的研究.pdf

1、目的：觀察布比卡因引起大鼠神經(jīng)毒性海馬基因表達譜的變化，在基因水平探究布比卡因中樞神經(jīng)毒性的機制。
　　方法：健康雄性8周SD大鼠6只，隨機分為布比卡因組（n=3）及對照組（n=3），各組組內(nèi)大鼠隨機編號。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，置于自制麻醉箱內(nèi)七氟醚吸入麻醉，尾靜脈穿刺置管，布比卡因組泵注0.75%布比卡因，直至大鼠出現(xiàn)煩躁、共濟失調(diào)、驚厥發(fā)作等毒性反應(yīng)，腦電圖出現(xiàn)驚厥波形后立即取材，對照組泵注生理鹽水。大鼠斷頸處死，解剖顯微鏡下

2、取海馬組織加入RNase-Free的生理鹽水，清洗，液氮冷凍保存。海馬組織總RNA采用Trizol試劑一步法提取, RNA的純度和含量用紫外分光光度計測量。根據(jù)Oligotex mRNA MidiKit純化mRNA。以四種脫氧核苷酸作原料,以mRNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下合成單鏈cDNA；再用單鏈cDNA為模板，以四種脫氧核苷酸作原料，繼續(xù)合成DNA另一條鏈，兩條DNA鏈合成雙鏈cDNA。然后以cDNA為模板，以Cy3-DTP、Cy5

3、-DTP為原料分別標記布比卡因組和對照組轉(zhuǎn)錄的cRNA。用RNeasy試劑盒純化，片段化后，將探針混合與測試芯片Test3預(yù)雜交進行質(zhì)控；符合要求后與Affymetrix大鼠全基因組芯片置于雜交艙內(nèi)雜交。布比卡因組大鼠出現(xiàn)驚厥時，記錄各大鼠的布比卡因用量。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s)表示。GeneChip Scanner3000掃描芯片檢測信號，Microarray Suite Version5.0

4、分析軟件分析基因是否表達，以及在對照組和布比卡因組之間表達程度是否有差異。
　　結(jié)果：（1）布比卡因用量:布比卡因組大鼠出現(xiàn)驚厥表現(xiàn)時輸注布比卡因用量達到（5.50±0.66）mg/kg。（2）基因表達差異結(jié)果：與對照組比較，布比卡因組海馬組織差異表達基因有107條，其中80條基因表達上調(diào)，包括Arid5a、Atf3、Bax、Caspase-3、Egr1、Fcgr3、Fgl2、Fos、Hspb1、Jun、Klf10、Lp1、Lit

5、af、Mt、Nans、Nr4a1、Pde4b、Plaa、Ptgs2、Timpl等基因，27條基因表達下調(diào)，其中包括Bcl-2、Eef2k、Fmo5、Grm3、Lrrfip2、Npy5r、Orc4、PI3K、RragB、Sdpr、Tpmt、Strbp、Wasl、 Znf386等基因。（3）基因生物學(xué)信息分析:這些差異性表達基因按照其編碼蛋白質(zhì)的功能可分為凋亡調(diào)控相關(guān)基因、信號傳導(dǎo)相關(guān)基因、轉(zhuǎn)錄相關(guān)基因、代謝相關(guān)基因、酶類相關(guān)基因等。