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文檔簡介
1、局部麻醉藥(簡稱局麻藥)根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu),分為酰胺類和酯類,常用于臨床麻醉。然而,大量研究表明,在多種類型細胞實驗中,長時間或高濃度使用局麻藥,會產(chǎn)生細胞毒性。在臨床應(yīng)用,也有關(guān)于局麻藥毒性作用的報道。盡管局麻藥臨床濃度所致毒性發(fā)生率很低,但一旦發(fā)生,會產(chǎn)生嚴重并發(fā)癥。尤其是脊髓麻醉后產(chǎn)生的短暫神經(jīng)綜合征、持續(xù)性腰骶神經(jīng)病變,以及最嚴重并發(fā)癥馬尾綜合征,多年來引起廣泛關(guān)注。對這些并發(fā)癥的發(fā)生,局麻藥的神經(jīng)毒性被認為是主要因素。然而,局麻藥
2、神經(jīng)毒性的確切機制,目前仍未可知。既往已有關(guān)于多種局麻藥神經(jīng)毒性大小的研究,但是對兩種類型局麻藥(酰胺類-布比卡因,酯類-普魯卡因)所致神經(jīng)毒性機制是否具有差異的全面性探索,目前國內(nèi)外仍未見報道?;诖耍O(shè)計本課題。
目的:
1.探索布比卡因和普魯卡因?qū)H-SY5Y細胞活力的影響。
2.比較布比卡因和普魯卡因?qū)H-SY5Y細胞和DRG神經(jīng)元細胞產(chǎn)生神經(jīng)毒性機制的異同。
方法:
1.分
3、別用不同濃度布比卡因和普魯卡因處理SH-SY5Y細胞,隨后使用CCK-8實驗和LDH實驗分別檢測細胞活力和細胞毒性,用曲線擬合計算兩種藥物LD50值,選取該值作為后續(xù)細胞模型的藥物濃度。
2.分別使用布比卡因和普魯卡因LD50值濃度處理SH-SY5Y細胞。隨后,使用Rhod-2-AM探針檢測線粒體內(nèi)鈣離子含量,JC-1試劑盒檢測線粒體膜電位變化,兩者共同反映細胞內(nèi)線粒體功能;使用DCFH-DA探針檢測細胞內(nèi)過氧化物含量,DHE
4、探針檢測細胞內(nèi)超氧化物含量,兩者共同反映細胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平;使用彗星實驗檢測DNA損傷,Western Blot實驗檢測DNA損傷標志蛋白p-γ-H2AX含量,兩者共同反映DNA損傷;使用TUNEL實驗檢測細胞凋亡,Western Blot實驗檢測凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase3、cleaved caspase9含量,兩者共同反映細胞凋亡情況。上述檢測也在DRG神經(jīng)元上進行驗證。
結(jié)果:
1.布比卡因和普
5、魯卡因均明顯降低SH-SY5Y細胞活力,并呈劑量依賴性。
2.布比卡因和普魯卡因均顯著誘導(dǎo)細胞線粒體內(nèi)鈣超載、線粒體膜電位下降、氧化應(yīng)激爆發(fā)、DNA損傷以及凋亡產(chǎn)生(P<0.05)。在細胞線粒體損傷和凋亡水平上,兩藥物組間無顯著差異(P>0.05)。但布比卡因比普魯卡因誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生更多超氧化物,早期DNA損傷程度更嚴重,而普魯卡因比布比卡因誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生更多過氧化物(P<0.05)。
結(jié)論:
布比卡因和普魯卡
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