hHcy對(duì)高血壓左心室重塑的基礎(chǔ)與臨床研究.pdf

1、研究目的：我國(guó)高血壓患者特點(diǎn)是合并同型半胱氨酸（Hcy）升高的比例很高，高同型半胱氨酸血癥（hHcy）不僅促進(jìn)高血壓的發(fā)生進(jìn)展，還是動(dòng)脈粥樣硬化疾病的重要危險(xiǎn)因子，對(duì)于Hcy在高血壓引起的心臟結(jié)構(gòu)和功能變化中的作用目前研究較少。越來(lái)越多的證據(jù)顯示免疫炎癥反應(yīng)在高血壓及其靶器官損傷（TOD）中發(fā)揮重要作用，輔助性T細(xì)胞17（Th17）和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）是目前研究最多的與心血管疾病相關(guān)的免疫細(xì)胞，由Th17/Treg免疫失衡導(dǎo)致的炎

2、癥紊亂參與了高血壓及其靶器官的炎癥反應(yīng)和損傷，Th17和Treg的分化分別受到其特異轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，而轉(zhuǎn)錄因子的活化與其啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)密切相關(guān)，Hcy是蛋氨酸的代謝產(chǎn)物，通過(guò)由N5-甲基四氫葉酸提供甲基再生成蛋氨酸，蛋氨酸循環(huán)的重要意義在于為體內(nèi)廣泛存在的甲基化提供甲基，血液中Hcy的代謝受阻使得某些基因的甲基化降低，從而影響基因的表達(dá)，在高血壓疾病中hHcy對(duì)Th17和Treg的分化是否產(chǎn)生影響尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究旨在以高齡老年高

3、血壓患者為研究對(duì)象，分析Hcy對(duì)高齡老年原發(fā)性高血壓患者左心室肥厚的影響。進(jìn)一步以自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）為研究對(duì)象，通過(guò)蛋氨酸喂養(yǎng)造成大鼠hHcy，觀(guān)察高Hcy對(duì)SHR心臟損傷的作用和對(duì)Th17/Treg平衡及其基因轉(zhuǎn)錄因子甲基化的影響。
　　研究?jī)?nèi)容與方法：（1）378例年齡≥80歲的原發(fā)性高血壓老年病例選自2012年1月至2015年1月在我科住院的患者，按Hcy水平分為非H型高血壓組142例和H型高血壓組236例，記錄身高

4、、體質(zhì)量、用藥情況及收縮壓、舒張壓、血漿Hcy、血脂、腎功能等，彩色多普勒超聲診斷儀測(cè)定左心室形態(tài)結(jié)構(gòu)，分析Hcy與左心室重構(gòu)的關(guān)系。（2）7周齡雄性SHR經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，給予普通飼料喂養(yǎng)或添加蛋氨酸飼料喂養(yǎng)，后者在成功制成高Hcy模型后再分為蛋氨酸組和添加B族維生素的治療組，所有大鼠每四周測(cè)量體重，進(jìn)行血壓測(cè)量及血漿Hcy濃度測(cè)定，分別于第8周、第12周、第16周和第20周行超聲心動(dòng)圖檢查，取血行流式細(xì)胞學(xué)分析Th17/Treg細(xì)胞

5、比例、進(jìn)行血漿炎癥指標(biāo)測(cè)定以及心臟組織取材進(jìn)行組織病理學(xué)和分子生物學(xué)檢測(cè)，20周末處死前進(jìn)行有創(chuàng)血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　（1）H型高血壓患者左心室肥厚比例高于非H型高血壓患者。H型高血壓組收縮壓、Hcy水平、左心室后壁厚度（LVPWT）、左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、心室間隔厚度（IVST）及左心室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）均高于非H型高血壓組[分別為（162.20±14.97）mmHg比（149.70±5.06）mmHg

6、，（19.76±5.83）μmol/L比（9.53±0.72）μmol/L，（9.77±2.35）mm比（9.21±2.68）mm，（9.74±3.15）mm比（8.51±2.42）mm，（118.64±39.38）g/m2比（101.85±41.71）g/m2]。單因素分析顯示Hcy與LVMI呈正相關(guān)，多變量logistic回歸顯示高h(yuǎn)Hcy是LVMI增高的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　?。?）蛋氨酸組與治療組前8周Hcy、收縮壓無(wú)差異，均

7、高于對(duì)照組，此后蛋氨酸組Hcy持續(xù)升高，收縮壓先升高于第12周達(dá)到最高后迅速降低；治療組于第8周后Hcy迅速下降，于第16周與對(duì)照組Hcy水平相同，血壓則為先小幅度升高后于第12周開(kāi)始降低。蛋氨酸組大鼠較之對(duì)照組及治療組最早出現(xiàn)左心室舒張末期內(nèi)經(jīng)（LVEDD）增高，20周末舒張功能明顯低于對(duì)照組和治療組，收縮功能自第16周開(kāi)始即出現(xiàn)明顯降低，至20周末亦分別低于對(duì)照組和治療組。第8周蛋氨酸組與治療組外周血Th17含量相近，均高于對(duì)照組，

8、第12周、第16周蛋氨酸組外周血Th17細(xì)胞含量繼續(xù)升高，均高于對(duì)照組與治療組，第20周末三組無(wú)差別。外周血中Treg的含量在實(shí)驗(yàn)的各時(shí)間點(diǎn)均以治療組為最高，各時(shí)間點(diǎn)均高于對(duì)照組，第12周、16周、20周分別高于蛋氨酸組。第8周蛋氨酸組和治療組外周血中白介素-17（IL-17）、白介素-6（IL-6）濃度及心肌中IL-17 mRNA、孤束核受體γt（RORγt）mRNA均顯著高于對(duì)照組，第12周時(shí)蛋氨酸組仍保持在較高水平，高于對(duì)照組和治

9、療組，治療組已下降至同對(duì)照組相近，第16周維持第12周變化趨勢(shì)，且IL-6水平在治療組降至低于對(duì)照組水平，20周時(shí)三組間IL-17、IL-6、RORγt mRNA差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IL-17 mRNA蛋氨酸組高于對(duì)照組和治療組。第8周蛋氨酸組和治療組外周血中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）、白介素-10（IL-10）濃度及心肌中IL-10 mRNA、FoxP3 mRNA濃度均明顯高于對(duì)照組，差異達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，之后治療組迅速增高并超過(guò)蛋氨

10、酸組，于第16周時(shí)蛋氨酸組和對(duì)照組上述四個(gè)指標(biāo)水平保持相近，而治療組則分別高于對(duì)照組和蛋氨酸組，且此趨勢(shì)維持至第20周。Western blot檢測(cè)各組大鼠心肌中RORγt和叉頭蛋白3（FoxP3）蛋白表達(dá)的變化，結(jié)果顯示，第8周蛋氨酸組、治療組RORγt和FoxP3蛋白均顯著高于對(duì)照組；第12、16周治療組RORγt表達(dá)下降與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，兩組均低于蛋氨酸組；FoxP3蛋白在第12周、16周均為蛋氨酸組高于對(duì)照組而低于治療組

11、，差異達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步分析Th17和Treg細(xì)胞相關(guān)基因的甲基化水平，結(jié)果顯示IL-17與RORγt基因啟動(dòng)子在蛋氨酸組呈低甲基化而在治療組呈高甲基化，與之相反，IL-10和FoxP3 DNA啟動(dòng)子則在蛋氨酸組呈高甲基化而在治療組呈現(xiàn)低甲基化。病理組織染色顯示第8周蛋氨酸組和治療組血管周?chē)w維面積與血管管腔面積比值(PVCA/LA)和膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)均高于對(duì)照組，此后蛋氨酸組第12周至第20周實(shí)驗(yàn)?zāi)┚S持此趨勢(shì)，治療組則第8

12、周以后，PVCA/LA逐漸下降，第16周低于蛋氨酸組而略高于對(duì)照組，第20周降至與對(duì)照組水平相近，治療組CVF改善較PVCA/LA為快，于第12周開(kāi)始低于蛋氨酸組略高于對(duì)照組，第16周及第20周與對(duì)照組無(wú)差異。
　　結(jié)論：hHcy是高血壓左心室肥厚的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，高Hcy可通過(guò)促進(jìn)SHR大鼠心肌間質(zhì)纖維化和心肌間血管周?chē)z原沉積導(dǎo)致心臟重構(gòu)，引起心臟舒張及收縮功能下降，葉酸、維生素B12可降低Hcy，部分逆轉(zhuǎn)上述改變，保護(hù)心功能。