痹祺提取物對(duì)CIA大鼠滑膜炎癥及血管新生相關(guān)因子的影響研究.pdf

1、目的：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種累及全身周圍關(guān)節(jié)為主的，系統(tǒng)性、炎癥性的，自身免疫性疾病。RA以慢性滑膜炎和血管翳形成為主要病理改變，滑膜炎和血管翳的持續(xù)存在可造成關(guān)節(jié)軟骨和骨質(zhì)破壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形。半個(gè)世紀(jì)以來(lái)，關(guān)于 RA的發(fā)病機(jī)制一直在發(fā)展變化,其中細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡，各類細(xì)胞因子相互作用導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎癥發(fā)生，是近來(lái)受到大家認(rèn)可并已得到研究證實(shí)的機(jī)制。因此，研究滑膜細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生

2、的細(xì)胞因子，尋找抑制滑膜炎癥和血管新生的有效靶點(diǎn)，一直是RA研究的熱點(diǎn)。痹祺（BIQI.BQ）功能益氣養(yǎng)血,祛風(fēng)除濕,活血止痛,對(duì)氣血不足,風(fēng)濕阻滯導(dǎo)致的肌肉關(guān)節(jié)酸痛,關(guān)節(jié)僵硬變形等有良好療效。但痹祺能否影響 RA關(guān)節(jié)滑膜炎癥和滑膜血管翳生成尚未見完整報(bào)導(dǎo)。本研究是在此基礎(chǔ)上通過(guò)復(fù)制Ⅱ型膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠模型,模擬 RA的發(fā)病過(guò)程,通過(guò)觀察 CIA大鼠關(guān)節(jié)炎癥及滑膜的病理改變并檢測(cè)骨橋蛋白（OPN）、白介素-18（IL-18

3、）、血管生成素-1（Ang-1）、腫瘤壞死因子-a（TNF-a）等相關(guān)因子的表達(dá)，探討痹祺提取物對(duì)CIA大鼠治療的可能機(jī)制，為臨床使用痹祺膠囊治療RA提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1．4周齡SD雌性大鼠,采用牛II型膠原和弗氏不完全佐劑1:1混合乳劑尾根部皮下注射,建立膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠模型。第一次注射0.2ml/只，間隔一周后，再次免疫，注射0.1ml/只。
　　2.55只SD雌性大鼠，首先隨機(jī)分為造模組45只

4、和空白對(duì)照組(N)10只，篩選出造模成功42只大鼠后，按足腫脹度隨機(jī)分為：模型組（C），痹祺高劑量組（BQ-15），痹祺中劑量組（BQ-10）各10只，甲氨蝶呤中劑量組（MTX-10）12只，初次免疫后兩周開始給藥，連續(xù)灌胃4周。
　　3.動(dòng)態(tài)觀察各組大鼠精神狀態(tài)、體重、活動(dòng)行為等變化。
　　4.初次免疫起，排水法隔日測(cè)量每組大鼠后肢踝關(guān)節(jié)以下體積，觀察各組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度變化。
　　5.用藥滿四周后，股動(dòng)脈取血處死大鼠

5、。酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清TNF-a、IL-18、OPN、Ang-1水平，免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)滑膜組織中 L-18、OPN、Ang-1的表達(dá)水平。同時(shí)HE染色，光鏡下觀察大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜的病理改變和血管新生情況。
　　結(jié)果：
　　1.CIA大鼠造模成功率達(dá)93.3﹪（42/45）：CIA大鼠后肢在第11天開始出現(xiàn)紅腫，第15天達(dá)到腫脹高峰，根據(jù)大鼠的關(guān)節(jié)腫脹癥狀、血清TNF-a水平與正常組的比較，證實(shí)造模成功。
　　2．關(guān)

6、節(jié)腫脹度： BQ-10組和MTX-10在用藥后前3周腫脹消退較BQ-15明顯，第4周三用藥組均出現(xiàn)明顯的腫脹消退。模型組消退較用藥組緩慢，用藥4周末三用藥組后肢腫脹度明顯低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.足踝關(guān)節(jié)HE病理片評(píng)價(jià)：BQ-15對(duì)滑膜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)有抑制作用，MTX-10對(duì)中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、滑膜細(xì)胞增生有抑制作用，BQ-10對(duì)中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，漿細(xì)胞、滑膜增生均有明顯抑制作用，以上

7、結(jié)果與模型組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.大鼠滑膜血管新生情況：模型組大鼠滑膜血管新生明顯增多，管腔擴(kuò)大充血，炎性細(xì)胞聚集。三個(gè)治療組血管新生均較模型組減輕，MVD值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。BQ-10組MVD值較其他兩治療組降低明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）
　　5.血清細(xì)胞因子水平比較：模型組大鼠血清中細(xì)胞因子TNF-α，IL-18，OPN,Ang-1水平均較空白對(duì)照組顯著升高（

8、P＜0.05）。三個(gè)治療組各細(xì)胞因子水平則較模型組降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中，BQ-10可顯著降低 IL-18， Ang-1水平，較其他二治療組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　6.滑膜組織細(xì)胞因子蛋白表達(dá)比較：模型組大鼠滑膜組織細(xì)胞因子 TNF-α， IL-18，OPN,Ang-1水平均較空白對(duì)照組有顯著升高（P＜0.05）。與模型組比較，三治療組滑膜組織各細(xì)胞因子表達(dá)均有降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

9、（P＜0.05）。其中，BQ-10與血清學(xué)檢測(cè)相同，IL-18，Ang-1表達(dá)均顯著降低，較其他二治療組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。三個(gè)治療組間滑膜OPN表達(dá)兩兩比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。
　　結(jié)論：痹祺提取物對(duì)膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎大鼠干預(yù)效應(yīng)確切，中高劑量均有降低大鼠關(guān)節(jié)腫脹癥狀，緩解關(guān)節(jié)炎癥，抑制滑膜血管新生作用?？赡苁峭ㄟ^(guò)抑制血清TNF-α，IL-18，OPN,Ang-1多種細(xì)胞因子水平，降低滑膜TNF-