木賊提取物對大鼠AS早期損傷的影響.pdf

1、目的：中藥木賊為木賊科植物木賊(EquisetumhiemaleL.)干燥的地上部分，具有降壓、鎮(zhèn)痛、抗過氧化脂質(zhì)形成及降低實驗性大鼠血脂的作用。有關(guān)實驗證實，中藥木賊水煎劑有明顯降低血脂，影響粘附分子表達，抑制單核細胞與內(nèi)皮細胞的粘附，減輕內(nèi)皮損傷，改善內(nèi)皮功能，阻斷AS啟動的早期事件發(fā)生，抗AS作用。為進一步探討木賊抗AS作用的有效部位，本實驗首先對其進行提取和分離，并用所得的提取物進行動物實驗，對比觀察兩組木賊提取物對不同指標(biāo)的藥

2、效作用，旨在證實木賊提取物同樣有抗AS的作用。 方法：1木賊有效部位的提取、分離 取木賊用蒸餾水1：100回流提取得木賊水煎劑，水煎劑用正丁醇萃取，正丁醇液回收至干，用蒸餾水定容至1.25g/ml(正丁醇提取物)，作為灌胃溶液；水煎劑萃取后剩余部分濃縮至濃度為1.25g/ml(正丁醇提取剩余物)，作為灌胃溶液。 2提取物的藥效動物實驗 選用健康雄性成年SD大鼠60只，隨機分為五組：正常對照組、模型組、陽性

3、對照組、木賊提取物Ⅰ組和木賊提取物Ⅱ組，每組12只，用高脂飼料復(fù)制大鼠早期AS模型，自造模開始，提取物Ⅰ組每日以木賊的正丁醇提取物1ml/100g體重.d(合生藥12.5g/kg.d)灌胃；提取物Ⅱ組每日以木賊水煎劑正丁醇提取剩余物1ml/100g體重.d(合生藥12.5g/kg.d)灌胃；陽性對照組每日以吉非羅齊0.16g/kg.d灌胃；正常對照組及模型組等量生理鹽水灌胃。九周末眶后取血，酶法檢測血脂水平；硝酸還原酶法測血清NO含量；

4、放射免疫分析法檢測血清ET、IL-1水平；流式細胞術(shù)檢測內(nèi)皮細胞凋亡率；取主動脈分別以肉眼、光鏡及電鏡觀察其內(nèi)膜形態(tài)變化。 結(jié)果：1實驗大鼠一般狀況 正常組大鼠毛色光澤，活動自如，活潑，飲食正常。模型組飼喂高脂飼料，體重增長較快，皮下脂肪厚，但隨實驗進程，毛發(fā)色澤暗淡，活動減少，精神狀態(tài)較差，進食量減少；陽性對照組、木賊提取物Ⅰ組及木賊提取物Ⅱ組均好于模型組。 2血脂的變化(見附表1) 模型組TC、TG、

5、LDL、VLDL較正常對照組明顯升高(P＜0.05)，HDL升高；陽性對照組TG、LDL、VLDL較模型組顯著降低(P＜0.05)，而HDL明顯升高(P＜0.05)；提取物Ⅰ組總TG、VLDL較模型組顯著降低(P＜0.05)，TC、LDL亦降低，而HDL升高；提取物Ⅱ組TG、VLDL較模型組降低(P＜0.05)，而HDL升高(P＜0.05)。 3血清NO和ET變化(見附表2) 模型組NO濃度顯著增高，ET較正常對照組明顯

6、升高；陽性對照組NO濃度較模型組升高，ET濃度較模型組顯著降低(P＜0.05)；提取物Ⅰ組的NO濃度增高，ET較模型組顯著降低(P＜0.05)；提取物Ⅱ組的NO濃度未見升高，ET較模型組降低。 4血清IL-1變化(見附表3) 模型組血清IL-1水平較正常組升高；陽性對照組IL-1濃度較模型組降低；提取物Ⅰ組的IL-1較模型組降低；提取物Ⅱ組的IL-1較模型組未見降低。 5主動脈內(nèi)皮細胞凋亡率的變化(見附表4及附圖

7、21-25)模型組EC凋亡率顯著高于正常對照組(P＜0.05)；陽性對照組、木賊提取物Ⅰ組及木賊提取物Ⅱ組的EC凋亡率顯著低于模型組(P＜0.05)。Ⅰ、Ⅱ組之間無差別。 6主動脈形態(tài)學(xué)改變(附圖1-20) 6.1肉眼觀察 正常組血管彈性好，內(nèi)膜表面平滑，富有光澤；模型組動脈彈性減低，管壁增厚，血管內(nèi)膜面光澤度稍差；陽性對照組、木賊提取物Ⅰ組及木賊提取物Ⅱ組與正常組相比變化不明顯。 6.2光鏡觀察(見附圖

8、1-10) 正常組動脈內(nèi)皮細胞連續(xù)完整而光滑，表面未見細胞粘附，內(nèi)膜下間隙較小，中膜平滑肌細胞排列規(guī)整，無增生；模型組血管壁增厚，內(nèi)膜不光滑，內(nèi)皮壞死脫落，呈不連續(xù)性缺失，大量單核細胞粘附于內(nèi)皮表面或潛入內(nèi)皮下，內(nèi)皮下間隙增寬，中膜淺層平滑肌細胞增生，可見中膜平滑肌細胞向內(nèi)膜遷移趨勢；陽性對照組內(nèi)膜損傷較輕，局部內(nèi)皮連續(xù)，可見少量單核細胞粘附，平滑肌細胞增生，但明顯好于模型組；提取物Ⅰ組內(nèi)膜較光滑，局部有少量單核細胞粘附，平滑肌

9、細胞增生，但明顯好于模型組；提取物Ⅱ組局部內(nèi)膜較光滑，可見內(nèi)皮細胞缺失，表面可見單核細胞粘附，平滑肌細胞增生，但好于模型組。 6.3掃描電鏡觀察(見附圖11-15) 正常組內(nèi)皮界限清楚，排列規(guī)整，連接緊密，細胞呈長梭形，核區(qū)飽滿，膜表面結(jié)構(gòu)清晰，可見典型微絨毛。模型組內(nèi)皮形態(tài)明顯異常，體積縮小，細胞間隙增大或出現(xiàn)深大裂隙，細胞表面微絨毛減少甚至消失，胞膜表面呈大小不等的蟲蝕狀、火山口狀缺損，洞內(nèi)嵌有紅細胞、白細胞，并可見

10、大片內(nèi)皮細胞崩解，甚至脫落僅余殘基，其表面可見血小板、血細胞和細胞碎屑纖維素等附著。陽性對照組、木賊提取物Ⅰ組及木賊提取物Ⅱ組內(nèi)皮細胞基本完整，排列較整齊，可見少量內(nèi)皮細胞缺損，細胞膜部分破壞，呈小洞狀，損傷明顯輕于模型組。 6.4透射電鏡觀察(見附圖16-20) 正常組內(nèi)皮完整，細胞間連接緊密，平滑肌細胞呈長梭形，胞漿內(nèi)含大量肌絲，細胞器較少，細胞核完整。模型組內(nèi)皮細胞破損，部分脫落殘缺，內(nèi)皮間連接處胞質(zhì)分離，變直、變

11、寬，出現(xiàn)較大間隙，其胞漿內(nèi)可見脂質(zhì)空泡形成。內(nèi)膜下間隙明顯變窄或消失，可見平滑肌走形紊亂，形狀不規(guī)則，多個胞突形成，有的呈典型的內(nèi)膜下遷移，伸出偽足將破損的內(nèi)皮細胞拱起，部分細胞體積肥大，核不規(guī)則，胞漿內(nèi)肌絲減少，細胞器增多，多量脂質(zhì)空泡及髓磷脂小體形成，細胞間質(zhì)增寬，基質(zhì)增多。陽性對照組、木賊提取物Ⅰ組及木賊提取物Ⅱ組可見內(nèi)皮細胞較完整，覆蓋于內(nèi)膜表面，細胞連接較好。內(nèi)膜下間隙明顯變的規(guī)則、清晰，較模型組增寬。平滑肌細胞突起明顯減少，