金雀異黃素對CIA大鼠關(guān)節(jié)FLS分泌的炎癥及血管新生相關(guān)因子影響的實驗研究.pdf

1、目的：觀察金雀異黃素(genistein，gen)對Ⅱ型膠原誘導型關(guān)節(jié)炎(collagen type IIinduced arthritis，CIA)大鼠關(guān)節(jié)成纖維樣滑膜細胞(fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS)分泌的白細胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosisfactor-α，TNF-α)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothel

2、ial growth factor，VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-1、2、3、9(matrix metalloproteinase，MMP-1、2、3、9)的影響。 研究對象：CIA大鼠關(guān)節(jié)原代成纖維樣滑膜細胞。 方法：首先，采用II型膠原和完全弗氏佐劑(complete Freund's adjuvant，CFA)共同建立CIA大鼠模型，對大鼠每周進行一次關(guān)節(jié)炎指數(shù)(arthritis index，AI)評分。于造模第六

3、周攝取關(guān)節(jié)X線片，然后處死大鼠，選取大鼠關(guān)節(jié)進行關(guān)節(jié)滑膜組織病理檢測，并取出關(guān)節(jié)滑膜組織，用膠原酶消化法分離培養(yǎng)原代成纖維樣滑膜細胞，流式細胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測滑膜細胞血管細胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)的表達。在CIA大鼠成纖維樣滑膜細胞培養(yǎng)中加入用不同濃度的gen(100μM，200μM，400μM)及MTX(lmg·L-1)，間接酶聯(lián)免疫吸

4、附實驗(enzyme linked immunosorbentassay，ELISA)法檢測大鼠成纖維樣滑膜細胞培養(yǎng)上清中IL-1β、TNF-α、VEGF及MMP-1、2、3、9的相對表達量。 結(jié)果： 1、Ⅱ型膠原致敏后三天，大鼠開始出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹，AI逐漸增高，至造模后第三周最為明顯，觀察AI評分、關(guān)節(jié)X線片以及關(guān)節(jié)滑膜組織病理發(fā)現(xiàn)，造模組與空白對照組比較有顯著性差異。表明造模成功，可滿足本實驗需要。 2、CIA

5、大鼠滑膜細胞培養(yǎng)至第4代，F(xiàn)CM檢測其VCAM-1的表達高達85.5％，提示所培養(yǎng)的細胞為成纖維樣滑膜細胞(FLS)，滿足本實驗要求。 3、不同濃度的gen(100μM，200μM，400μM)及MTX(lmg·L-1)作用于FLS后，細胞培養(yǎng)上清中IL-1β、TNF-α、VEGF和MMP-1、2、3、9的分泌受到抑制，且gen的抑制作用隨藥物濃度增加呈劑量依賴性增強。 結(jié)論： 1、本實驗成功構(gòu)建了CIA大鼠模型