HIF-1α和HIF-2α基因在靈長類中的分子進化研究.pdf

1、靈長目(Order Primates)是脊索動物門(Phylum Chordata)哺乳綱(Mammalia)的一個目。非人靈長類在形態(tài)結構、生理機能和生化代謝方面與人相似，一直以來都是研究的熱點，氧穩(wěn)態(tài)的維持是生物體細胞生命活動的基本前提，主要的維持氧平衡的調節(jié)因子是缺氧誘導因子(hypoxia-inducible factors，HIFs)，HIEs是由調節(jié)亞基α和結構亞基β組成的二聚體，HIF-α亞基有3種異構體，分別是HIF-1

2、α，HIF-2α和HIF-3α，其中HIF-1α、HIF-2α是細胞在缺氧應答反應中最重要的調節(jié)因子，通過對靈長類動物HIF-1α和HIF-2α的分子進化研究，將有助于理解靈長類動物應對這一自然選擇時，表現(xiàn)出的適應與進化。
　　本研究通過PCR擴增技術及測序技術，獲得4個靈長類動物HIF-1α和HIF-2α的完整編碼區(qū)序列，它們分別是川金絲猴（Pygathrix roxellanae）、豚尾猴（Macacanemestrina）、

3、藏酋猴（Macaca thibetana）、和白臀葉猴（Pygathrix nemaeus），從公共數(shù)據庫中下載得到10個其他靈長類動物的HIF-1α和HIF-2α基因完整編碼區(qū)序列。在基于這些物種HIF-1α和HIF-2α基因編碼區(qū)序列的基礎上，利用MEGA6.0及Lasergene軟件包對序列進行整理分析核苷酸和氨基酸序列特征，利用Bioedit軟件內置程序對序列的相似度進行計算，NCBI在線預測蛋白質結構域，分別使用鄰接(NJ)法

4、和最大似然(ML)法對兩個基因進行系統(tǒng)發(fā)育樹的重建，利用分子進化的相關理論知識，對靈長類動物中HIF-1α和HIF-2α基因的進化情況進行初步探討，并得到如下一些主要結果:
　　1)本研究成功擴增出川金絲猴、豚尾猴、藏酋猴、白臀葉猴的HIF-1α和HIF-2α基因完整編碼區(qū)序列;HIF-1α基因序列在這四個物種中的長度為2481 bp，HIF-2α基因的長度在白臀葉猴屬的兩個物種白臀葉猴和藏酋猴中為2610bp，在獼猴屬的川金絲猴

5、和豚尾猴中為2595 bp。
　　2)利用測得的序列和數(shù)據庫中已經報道的序列對靈長類動物的同源性進行比較，同源性結果顯示，相似度均較高，HIF-1α基因核苷酸的同源性在93％以上，氨基酸同源性在95％以上;HIF-2α基因核苷酸的同源性在87％以上，氨基酸同源性在88％以上;除此之外，原猴亞目表現(xiàn)出與人猿亞科較高的相似度。
　　3)通過NCBI在線CDD軟件預測HIF-1α和HIF-2α蛋白的保守結構域，結果顯示，HIF-1

6、α與HIF-2α蛋白均具有非常明顯的bHLH-PAS結構、ODD區(qū)和C-TAD區(qū)，且這兩個基因的結構相似。
　　4)通過鄰接法和最大似然法對所獲得的HIF-1α與HIF-2α基因構建系統(tǒng)發(fā)育樹，結果顯示NJ樹和ML樹具有相同的拓撲結構。分為人、大猿、小猿、舊大陸猴、新大陸猴和原猴6個大的聚類，各類靈長類動物的物種很好的聚為單群，且分枝間的分歧通過置信值得到了很好的支持。
　　5)通過PAML平臺和對靈長類的進化速率進行估算，

7、選擇壓力顯示HIF-1α和HIF-2α在各物種間受到了強烈的純凈化選擇，表明他們的功能對生物的生命維系具有重要的作用。按照原猴、新大陸猴、舊大陸猴、小猿、大猿和人分類，HIF-1α在各類群中的進化速率并沒有表現(xiàn)出明顯的差異，HIF-2α則有顯著的差異，且在原猴亞目檢測多個正選擇位點。
　　本研究從分子進化的角度出發(fā)，探討HIF-1α和HI F-2α基因在靈長類中的系統(tǒng)發(fā)育及選擇壓力，為靈長類轉錄因子基因的進化研究提供基礎，為更好的