14-3-3η介導(dǎo)黃芪甲苷抗心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　黃芪甲苷（As-IV）是黃芪中的一種小分子的活性三萜皂苷成分，目前，已經(jīng)證明對許多心血管疾病有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)主要目的是研究As-IV在抗心肌缺氧/復(fù)氧損傷中的作用機(jī)制，以闡明As-IV對抗心肌缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用主要是否通過14-3-3η蛋白介導(dǎo)。
　　方法:
　　在本實(shí)驗(yàn)中，大鼠H9c2心肌細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)載體，通過體外心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧(A/R)損傷模型模擬體內(nèi)心肌缺血再灌注（I/R）損傷模型。實(shí)驗(yàn)隨

2、機(jī)分成7組，每組重復(fù)4次：
　?。?）正常組（control組）；
　?。?）A/R組；
　?。?）25μM AS-IV+A/R組；
　?。?）50μM AS-IV+A/R組；
　?。?）100μM AS-IV+ A/R組；
　?。?）50μM As-IV+AD14-3-3ηRNAi+A/R組；
　　（7）50μM As-IV+ADscrRNAi+A/R組。
　　MTS法檢測細(xì)胞存活率；分

3、光光度法檢測LDH活性；蛋白免疫印跡法（western blotting）檢測14-3-3η蛋白的表達(dá)；JC-1檢測細(xì)胞線粒體膜電位(Δψm)；DCFH-DA法檢測心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平；Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：
　　1.與A/R組比較，As-IV預(yù)處理大鼠H9c2心肌細(xì)胞可減少LDH釋放，降低LDH活性（P＜0.05），增加細(xì)胞存活率（P＜0.05）；
　　2.蛋白免疫印跡法實(shí)

4、驗(yàn)結(jié)果表明，50μM As-IV預(yù)處理可使14-3-3η蛋白的表達(dá)量增加（P＜0.05）；
　　3.流式檢測結(jié)果表明，50μM As-IV預(yù)處理大鼠H9c2心肌細(xì)胞可使細(xì)胞內(nèi)活性氧水平降低，細(xì)胞線粒體膜電位穩(wěn)定，心肌細(xì)胞凋亡減少（P＜0.01）；
　　4.腺病毒14-3-3ηRNAi可以取消或減弱上述As-IV所產(chǎn)生的心肌保護(hù)作用。
　　結(jié)論：
　　As-IV可以增加14-3-3η蛋白的表達(dá)量，由14-3-3η蛋