不同濃度褪黑素對ICSI周期中未成熟卵子體外培養(yǎng)成熟及后續(xù)胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、目的：
　　1．將不同濃度的褪黑素加入IVM培養(yǎng)液中，培養(yǎng)ICSI周期中人未成熟卵母細(xì)胞，探索不同濃度褪黑素對人類未成熟卵母細(xì)胞體外成熟以及后續(xù)胚胎發(fā)育的影響。2.根據(jù)對加有褪黑素的IVM液中培養(yǎng)成熟的卵母細(xì)胞線粒體膜電位與不加褪黑素培養(yǎng)成熟的卵母細(xì)胞線粒體膜電位的分析，初步探索褪黑素在人未成熟卵體外培養(yǎng)成熟中的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.將來自于ICSI周期中的602枚未成熟卵子隨機(jī)加入含有不同濃度褪黑素的IVM

2、液中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)24h后對成熟的卵母細(xì)胞行ICSI受精，ICSI后16-18h觀察受精情況，挑選出正常受精卵進(jìn)行囊胚培養(yǎng)。根據(jù)在 IVM液中所加褪黑素濃度的不同，實驗分為6組（0，10-11M,10-9M,10-7M,10-5M,10-3M），未加褪黑素組為對照組，其余5組為實驗組。比較每組中卵子的成熟率，受精率，卵裂率，囊胚形成率以及優(yōu)質(zhì)囊胚形成率情況。并且通過aCGH技術(shù)對優(yōu)質(zhì)囊胚的染色體進(jìn)行檢測，判斷非整倍體發(fā)生概率。2．將來自

3、對照組中經(jīng)過 IVM培養(yǎng)成熟的13枚卵子和MT=10-5M組中IVM成熟的15枚卵子進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。用JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒將成熟的卵母細(xì)胞的線粒體膜電位進(jìn)行染色，在倒置熒光顯微鏡下，分別在紅色熒光和綠色熒光模塊下進(jìn)行觀察，及時拍照。然后用 Image J軟件測量同一卵母細(xì)胞的紅色熒光和綠色熒光強(qiáng)度值，得到二者熒光強(qiáng)度比值，通過紅綠熒光強(qiáng)度比值來反應(yīng)線粒體膜電位強(qiáng)度。
　　結(jié)果：
　　1.與對照組相比，10-

4、9M,10-7M,10-5M組優(yōu)質(zhì)囊胚率均顯著增高（75±4.4％，63.5±5.4%，60±4.7% VS11.1±5.4%,p<0.05），且10-9M組優(yōu)質(zhì)囊胚形成率最高。與對照組相比，10-3M組卵裂率及囊胚形成率均顯著降低（73.8±1.2%VS.90.2±0.6%；2±0.2% VS.16.4±0.6%；p<0.05）。本研究共獲得30枚優(yōu)質(zhì)囊胚，隨機(jī)選取11枚優(yōu)質(zhì)囊胚行aCGH檢測（1枚來自對照組，10枚來自實驗組），對照

5、組中1枚優(yōu)質(zhì)囊胚為非整倍體，核型為49，XX（+1，+15，+17）；另外實驗組中2枚胚胎染色體異常，分別為46，XX(+11，-15)（10-11M組）；和46，XX（-7(q36.2～q36.3)）（10-7M組），其余8枚(4枚來自10-9組，1枚來自10-7組，2枚來自10-5組，另1枚來自10-11組)均為正常胚胎。2.與對照組相比，10-5M組成熟卵母細(xì)胞線粒體膜電位熒光強(qiáng)度比值明顯增高（0.58±0.3 VS.0.35±0