兩種人類傳染病相關蛋白的表達、純化及結構研究.pdf

1、人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）和腸道病毒68型（Enterovirus68，EV68）是嚴重威脅到公共健康的RNA病毒，目前尚未研制出高效的特異性抗病毒藥物和疫苗，因此探索病毒的復制機制以及新的藥物靶點一直都是病毒學領域研究的重難點。本研究希望通過對與病毒復制相關的兩種蛋白結構和功能的研究，為病毒的致病機理以及設計靶向藥物奠定良好的基礎。
　　HIV是一種感染人類免疫系統(tǒng)細胞的

2、逆轉錄病毒，分為HIV-1和HIV-2型，其中HIV-1型是在全球范圍內流行的艾滋病的主要病原體。宿主細胞為抑制病毒復制表達了限制性因子 APOBEC3H，其 HapⅡ亞型最穩(wěn)定且具有強抗病毒活性和抑制轉座子能力，能與HIV-1 Vif蛋白結合并被Vif拮抗了抗病毒作用，因而被廣泛的關注和研究。本研究利用昆蟲表達系統(tǒng)表達出大量可溶性A3H hapII蛋白，并證明其能夠與HIV-1 Vif特異性的結合。我們將構建好的A3H hapII-H

3、is重組粘粒Bacmid轉染至昆蟲sf9細胞并通過擴增獲得第三代病毒，進而感染sf9細胞表達和得到目的蛋白。經Ni-NAT親和層析純化的目的蛋白，通過免疫共沉淀實驗檢測與HIV-1 Vif之間的特異性結合。本論文研究內容成功建立A3H hapII昆蟲表達體系，為進一步研究A3H hapII與HIV-1 Vif之間相互作用機制并針對其相互作用位點設計抗HIV藥物奠定了基礎。
　　EV68是一種主要感染呼吸道的RNA病毒。近幾年，不同

4、地區(qū)及國家都有不同程度的EV68型感染疫情爆發(fā)，因此 EV68病毒引起了廣泛的關注。EV68病毒基因組編碼7種非結構蛋白和4種結構蛋白，其中非結構蛋白3A在復制復合物中具有重要的作用。3A蛋白的可溶區(qū)N端（1-61）對3A的生物學功能有重要意義，但目前關于EV68型3A-N結構的研究報道較少。本研究主要通過原核表達系統(tǒng)，表達出大量且高純度的3A-N蛋白并對其結構進行了初步研究。我們將構建的原核表達質粒轉化至大腸桿菌 BL21（DE3），