細(xì)胞色素P450表氧化酶2J2及其代謝產(chǎn)物EETs抑制AngⅡ誘導(dǎo)的心臟重構(gòu).pdf

1、研究背景和目的：
　　心臟重構(gòu)是由心臟超負(fù)荷或者損傷引起的病理狀態(tài)，表現(xiàn)為心臟大小、形態(tài)和隨后的功能變化，這些變化嚴(yán)重影響疾病預(yù)后。因此，對心臟重構(gòu)預(yù)防和治療的研究具有重大的臨床意義。CYP2J2代謝花生四烯酸生成EETs。CYP2J2/EETs系統(tǒng)廣泛存在于人類的心血管系統(tǒng)中，國內(nèi)外研究表明 CYP2J2/EETs對心血管具有廣泛的保護(hù)作用，而且極有可能參與了心臟重構(gòu)的病理生理調(diào)節(jié)，然而目前對這一科學(xué)問題的研究和認(rèn)識非常有限，故

2、本研究對 CYP2J2/EETs系統(tǒng)抗心臟重構(gòu)的作用和機理進(jìn)行了系統(tǒng)深入的研究。由于心肌細(xì)胞和心肌成纖維細(xì)胞在心臟重構(gòu)的過程中發(fā)揮了重要的作用，本研究著重從 CYP2J2/EETs對心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的作用方面闡明其抗心臟重構(gòu)的作用和機制。
　　實驗方法及結(jié)果：
　　8周齡的C57BL/6小鼠（野生型）和aMHC-CYP2J2-Tr小鼠（心肌細(xì)胞特異性高表達(dá)CYP2J2的小鼠）以1.5μg/kg/min的劑量持續(xù)泵入Ang

3、II2周。通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，本研究證實心肌細(xì)胞高表達(dá) CYP2J2增加了心肌組織和循環(huán)血中 EETs水平，同時本研究證明心肌細(xì)胞特異性高表達(dá)CYP2J2抑制了Ang II誘導(dǎo)的心肌肥厚、心肌纖維化和心功能不全。CYP2J2的保護(hù)作用與激活PPARγ和抑制氧化應(yīng)激/NF-κB及 TGF-β1/smad兩個通路相關(guān)，而 CYP2J2的保護(hù)作用同時也被 PPARγ阻斷劑GW9662部分阻斷。體外實驗結(jié)果闡明了CYP2J2的代謝產(chǎn)物E

4、ETs對心肌細(xì)胞和心肌成纖維細(xì)胞的作用和機制。首先，在心肌細(xì)胞中，11,12-EET抑制AngII誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大、重構(gòu)相關(guān)蛋白（TIMP1、TGF-β1和Collagen I）的表達(dá)，其保護(hù)作用與激活PPARγ和抑制氧化應(yīng)激/NF-κB通路相關(guān)。與此同時，PPARγ的阻斷劑GW9662抑制了11,12-EET的心肌細(xì)胞保護(hù)效應(yīng)和氧化應(yīng)激/NF-κB通路，而氧化應(yīng)激的清除劑NAC發(fā)揮了與11,12-EET類似且協(xié)同的效應(yīng)。這表明EET

5、s通過激活PPAR-γ進(jìn)而抑制氧化應(yīng)激介導(dǎo)的NF-?B信號通路，最終抑制Ang II誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大和重構(gòu)相關(guān)蛋白表達(dá)。此外，被11,12-EET干預(yù)后的心肌細(xì)胞條件培養(yǎng)液能抑制成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化和TGF-β1/Smad信號通路的激活。其次，在成纖維細(xì)胞中，11,12-EET直接作用于心肌成纖維細(xì)胞，抑制 Ang II誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞增殖、遷移、轉(zhuǎn)分化和分泌膠原，且NO/cGMP通路的激活和Gα12/13及下游RhoA/ROCK通

6、路的抑制參與了這一過程。而siRNA介導(dǎo)的Gα12/13或RhoA的沉默與11,12-EET發(fā)揮了類似效應(yīng)。與此同時，NO/cGMP通路的抑制劑部分阻斷了11,12-EET對Gα12/13的抑制作用。這些結(jié)果表明CYP2J2/EETs通過NO/cGMP途徑抑制Gα12/13及其下游RhoA/ROCK通路，進(jìn)而抑制心肌成纖維細(xì)胞的纖維化反應(yīng)。
　　結(jié)論：
　　CYP2J2/EETs抑制AngII誘導(dǎo)的心臟重構(gòu)，其機制主要包括對

7、心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的作用。首先，在心肌細(xì)胞中，CYP2J2/EETs通過激活PPAR-γ抑制氧化應(yīng)激進(jìn)而抑制NF-κBP65入核，從而抑制心肌細(xì)胞肥大及重構(gòu)相關(guān)蛋白的表達(dá)。另外，EETs通過抑制心肌細(xì)胞旁分泌促纖維化因子，進(jìn)而抑制心肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化和TGF-β1/Smad信號通路的激活。其次，在心肌成纖維細(xì)胞中，CYP2J2/EETs通過NO/cGMP途徑抑制Gα12/13及其下游RhoA/ROCK通路，進(jìn)而抑制心肌成纖維細(xì)胞的纖