Il-37通過調(diào)節(jié)樹突狀細胞關(guān)鍵細胞因子的表達影響T細胞功能.pdf

1、背景:樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)能夠高效處理、加工和提呈抗原，是功能最強的抗原提呈細胞。DCs能夠?qū)⒖乖岢式oT淋巴細胞和B淋巴細胞，激活淋巴細胞，從而能夠誘發(fā)一系列免疫應(yīng)答，在機體細胞免疫應(yīng)答中扮演起動者的角色。細菌脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)是革蘭氏陰性細菌細胞壁的主要成分，能夠誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。TNF-α能在機體炎癥階段分泌，明顯促進T細胞的增殖，增強其殺傷作用。IL-6的

2、大量表達，能減弱中性粒細胞的吞噬能力，加劇炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，從而能進一步加快炎癥反應(yīng)進程。當(dāng)炎癥反應(yīng)發(fā)生時，LPS與細胞表面CD14發(fā)生特異性結(jié)合，促進大量炎癥因子的分泌，從而介導(dǎo)一系列生物學(xué)反應(yīng)。白細胞介素37(interleukin-37，IL-37)是目前唯一沒有發(fā)現(xiàn)鼠同系物的IL-1家族成員。在骨髓、肝臟、胸腺、肺等組織中均能檢測到IL-37的表達。IL-37參與多種炎癥性疾病和免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展。在自然殺傷細胞和單核細胞中，I

3、L-37與IL-18BP結(jié)合后，能夠與IL-18Rβ形成復(fù)合物，抑制IL-18的活性，從而抑制炎癥因子IFN-γ的產(chǎn)生。然而IL-37對DCs作用及其在免疫及感染性疾病中的作用機制還不明確。IL-37對DCs炎癥因子表達及其在炎癥中的作用的影響還有待進一步探討。
　　目的:探討IL-37對LPS誘導(dǎo)的B6小鼠骨髓細胞誘導(dǎo)的樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)分泌炎癥因子的調(diào)節(jié)。
　　方法:取小鼠骨髓細胞，誘導(dǎo)

4、其分化為DCs，用IL-37處理后分別用LPS刺激，流式細胞儀檢測細胞表面共刺激分子(CD80、CD86)，RT-PCR法檢測腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細胞介素6(IL-6)和白細胞介素1α(IL-1α)mRNA的表達，多重液相蛋白定量CBA試劑盒檢測細胞上清中IL-1α、IL-6、TNF-α蛋白的表達。
　　結(jié)果:磁珠分選分離高純度的DCs，能夠滿足本實驗的要求。IL-37能夠減少LPS誘導(dǎo)的DCs表面共刺激分子CD80、

5、CD86的表達，并抑制DCs分泌IL-1α、IL-6、TNF-α。
　　結(jié)論:IL-37可以抑制DC細胞炎癥因子的分泌，調(diào)節(jié)細胞炎癥因子網(wǎng)絡(luò)的平衡，具有一定的抗炎作用，從而抑制免疫反應(yīng)。
　　課題二白細胞介素37(IL-37)通過調(diào)節(jié)樹突狀細胞關(guān)鍵細胞因子的表達影響T細胞功能
　　背景:樹突狀細胞(DC)在人體大多數(shù)組織中均能檢測到，是一種數(shù)量比較少的細胞群體，約占各組織總細胞的0.1到2％不等。DC是專職抗原提呈細胞

6、(antigenpresenting cells，APC)，能夠通過捕獲，處理，提呈抗原和激活幼稚T細胞，在活化免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用[1]。在穩(wěn)態(tài)條件下，DC能保持未成熟的狀態(tài)，而當(dāng)有炎癥信號刺激時，未成熟的DC能夠被激活?；罨腄C能夠上調(diào)共刺激分子如CD80，CD86和CD40，從而促進T細胞的活化和擴展[2-4]。
　　白細胞介素(IL)-1家族的細胞因子在多種免疫性炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用[5，6]。同時

7、IL-1家族是機體對抗病原微生物和物理損壞的第一道防線。IL-37是最近發(fā)現(xiàn)的IL-1家族的新成員，是固有免疫系統(tǒng)的一個基本的抑制劑。IL-37能夠表達于多種正常組織和腫瘤組織中[7-10]。Kumar及其同事已經(jīng)證實，IL-37蛋白能夠在扁桃體，皮膚，食道，胎盤，黑色素瘤以及肺，前列腺，結(jié)腸和乳腺癌中表達，但是表達水平較低[11]。經(jīng)過誘導(dǎo)的外周血單個核細胞(PBMC)和樹突狀細胞也能夠表達IL-37[10]。
　　盡管大量的文

8、獻對IL-37基因位點的測序進行了很多工作，但仍沒有發(fā)現(xiàn)小鼠同源的IL-37的表達。IL-37在抑制免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，具有調(diào)節(jié)樹突狀細胞功能的作用。然而，IL-37在細胞中發(fā)揮具體的機制尚不十分清楚。
　　目的:研究IL-37對DC免疫表型和功能特點以及對CD4+和CD8+T細胞的影響，從而能夠進一步說明IL-37在免疫性疾病中的作用。
　　方法:取小鼠骨髓細胞，誘導(dǎo)其分化為DCs，用IL-37處理后，流式細胞儀檢測細

9、胞表面共刺激分子(CD80、CD86、CD40)，RT-PCR法檢測腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細胞介素6(IL-6)、白細胞介素10(IL-10)、和轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)mRNA的表達，多重液相蛋白定量CBA試劑盒及ELISA試劑盒檢測細胞上清中TNF-α、IL-6、IL-10和TGF-β蛋白的表達。流式細胞術(shù)及Western方法檢測樹突狀細胞中磷酸化蛋白的表達。應(yīng)用蛋白抑制劑后檢測炎癥因子的表達。將DC與T細胞共培養(yǎng)，流

10、式細胞術(shù)檢測T細胞增殖(CFSE)及活化程度（CD25和CD69）。
　　結(jié)果:IL-37能夠下調(diào)樹突狀細胞表面共刺激分子CD80和CD86的表達。與此同時，促炎因子TNF-α和IL-6的表達被明顯抑制，而T細胞抑制因子TGF-β明顯增高。IL-37預(yù)處理的樹突狀細胞明顯降低T細胞的增殖和活化能力。IL-37能夠降低樹突狀細胞中磷酸化ERK，NF-κB和S6K表達。IL-37處理的樹突狀細胞對CD4+T細胞和CD8+T細胞產(chǎn)生明顯