Il-37通過(guò)調(diào)節(jié)樹(shù)突狀細(xì)胞關(guān)鍵細(xì)胞因子的表達(dá)影響T細(xì)胞功能.pdf

1、背景:樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)能夠高效處理、加工和提呈抗原，是功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞。DCs能夠?qū)⒖乖岢式oT淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，激活淋巴細(xì)胞，從而能夠誘發(fā)一系列免疫應(yīng)答，在機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答中扮演起動(dòng)者的角色。細(xì)菌脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分，能夠誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。TNF-α能在機(jī)體炎癥階段分泌，明顯促進(jìn)T細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)其殺傷作用。IL-6的

2、大量表達(dá)，能減弱中性粒細(xì)胞的吞噬能力，加劇炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，從而能進(jìn)一步加快炎癥反應(yīng)進(jìn)程。當(dāng)炎癥反應(yīng)發(fā)生時(shí)，LPS與細(xì)胞表面CD14發(fā)生特異性結(jié)合，促進(jìn)大量炎癥因子的分泌，從而介導(dǎo)一系列生物學(xué)反應(yīng)。白細(xì)胞介素37(interleukin-37，IL-37)是目前唯一沒(méi)有發(fā)現(xiàn)鼠同系物的IL-1家族成員。在骨髓、肝臟、胸腺、肺等組織中均能檢測(cè)到IL-37的表達(dá)。IL-37參與多種炎癥性疾病和免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展。在自然殺傷細(xì)胞和單核細(xì)胞中，I

3、L-37與IL-18BP結(jié)合后，能夠與IL-18Rβ形成復(fù)合物，抑制IL-18的活性，從而抑制炎癥因子IFN-γ的產(chǎn)生。然而IL-37對(duì)DCs作用及其在免疫及感染性疾病中的作用機(jī)制還不明確。IL-37對(duì)DCs炎癥因子表達(dá)及其在炎癥中的作用的影響還有待進(jìn)一步探討。
　　目的:探討IL-37對(duì)LPS誘導(dǎo)的B6小鼠骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)的樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)分泌炎癥因子的調(diào)節(jié)。
　　方法:取小鼠骨髓細(xì)胞，誘導(dǎo)

4、其分化為DCs，用IL-37處理后分別用LPS刺激，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面共刺激分子(CD80、CD86)，RT-PCR法檢測(cè)腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)和白細(xì)胞介素1α(IL-1α)mRNA的表達(dá)，多重液相蛋白定量CBA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞上清中IL-1α、IL-6、TNF-α蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:磁珠分選分離高純度的DCs，能夠滿(mǎn)足本實(shí)驗(yàn)的要求。IL-37能夠減少LPS誘導(dǎo)的DCs表面共刺激分子CD80、

5、CD86的表達(dá)，并抑制DCs分泌IL-1α、IL-6、TNF-α。
　　結(jié)論:IL-37可以抑制DC細(xì)胞炎癥因子的分泌，調(diào)節(jié)細(xì)胞炎癥因子網(wǎng)絡(luò)的平衡，具有一定的抗炎作用，從而抑制免疫反應(yīng)。
　　課題二白細(xì)胞介素37(IL-37)通過(guò)調(diào)節(jié)樹(shù)突狀細(xì)胞關(guān)鍵細(xì)胞因子的表達(dá)影響T細(xì)胞功能
　　背景:樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)在人體大多數(shù)組織中均能檢測(cè)到，是一種數(shù)量比較少的細(xì)胞群體，約占各組織總細(xì)胞的0.1到2％不等。DC是專(zhuān)職抗原提呈細(xì)胞

6、(antigenpresenting cells，APC)，能夠通過(guò)捕獲，處理，提呈抗原和激活幼稚T細(xì)胞，在活化免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用[1]。在穩(wěn)態(tài)條件下，DC能保持未成熟的狀態(tài)，而當(dāng)有炎癥信號(hào)刺激時(shí)，未成熟的DC能夠被激活。活化的DC能夠上調(diào)共刺激分子如CD80，CD86和CD40，從而促進(jìn)T細(xì)胞的活化和擴(kuò)展[2-4]。
　　白細(xì)胞介素(IL)-1家族的細(xì)胞因子在多種免疫性炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用[5，6]。同時(shí)

7、IL-1家族是機(jī)體對(duì)抗病原微生物和物理?yè)p壞的第一道防線(xiàn)。IL-37是最近發(fā)現(xiàn)的IL-1家族的新成員，是固有免疫系統(tǒng)的一個(gè)基本的抑制劑。IL-37能夠表達(dá)于多種正常組織和腫瘤組織中[7-10]。Kumar及其同事已經(jīng)證實(shí)，IL-37蛋白能夠在扁桃體，皮膚，食道，胎盤(pán)，黑色素瘤以及肺，前列腺，結(jié)腸和乳腺癌中表達(dá)，但是表達(dá)水平較低[11]。經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)和樹(shù)突狀細(xì)胞也能夠表達(dá)IL-37[10]。
　　盡管大量的文

8、獻(xiàn)對(duì)IL-37基因位點(diǎn)的測(cè)序進(jìn)行了很多工作，但仍沒(méi)有發(fā)現(xiàn)小鼠同源的IL-37的表達(dá)。IL-37在抑制免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，具有調(diào)節(jié)樹(shù)突狀細(xì)胞功能的作用。然而，IL-37在細(xì)胞中發(fā)揮具體的機(jī)制尚不十分清楚。
　　目的:研究IL-37對(duì)DC免疫表型和功能特點(diǎn)以及對(duì)CD4+和CD8+T細(xì)胞的影響，從而能夠進(jìn)一步說(shuō)明IL-37在免疫性疾病中的作用。
　　方法:取小鼠骨髓細(xì)胞，誘導(dǎo)其分化為DCs，用IL-37處理后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)

9、胞表面共刺激分子(CD80、CD86、CD40)，RT-PCR法檢測(cè)腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素10(IL-10)、和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)mRNA的表達(dá)，多重液相蛋白定量CBA試劑盒及ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞上清中TNF-α、IL-6、IL-10和TGF-β蛋白的表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)及Western方法檢測(cè)樹(shù)突狀細(xì)胞中磷酸化蛋白的表達(dá)。應(yīng)用蛋白抑制劑后檢測(cè)炎癥因子的表達(dá)。將DC與T細(xì)胞共培養(yǎng)，流

10、式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T細(xì)胞增殖(CFSE)及活化程度（CD25和CD69）。
　　結(jié)果:IL-37能夠下調(diào)樹(shù)突狀細(xì)胞表面共刺激分子CD80和CD86的表達(dá)。與此同時(shí)，促炎因子TNF-α和IL-6的表達(dá)被明顯抑制，而T細(xì)胞抑制因子TGF-β明顯增高。IL-37預(yù)處理的樹(shù)突狀細(xì)胞明顯降低T細(xì)胞的增殖和活化能力。IL-37能夠降低樹(shù)突狀細(xì)胞中磷酸化ERK，NF-κB和S6K表達(dá)。IL-37處理的樹(shù)突狀細(xì)胞對(duì)CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生明顯