T2DM腎病大鼠腎動脈BKCa通道m(xù)RNA的表達與腎臟病變相關(guān)性研究.pdf

1、目的：揭示不同病程2型糖尿病（Type2 diabetes mellitus,T2DM）腎病大鼠腎動脈大電導(dǎo)鈣激活鉀通道(BKCa）基因表達變化與腎臟病變之間有無相關(guān)性。方法：1.建立模型：適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，將60只SD大鼠隨機分組，對照組（10只）和模型組（50只）。模型組進行左腎切除手術(shù)，對照組進行左腎切除假手術(shù)。模型組喂高脂高糖飼料（主要配料為10％豬油，2.5%膽固醇,20%蔗糖，1%膽酸鹽，66.5%常規(guī)飼料）；對照組僅喂飼普

2、通飼料。第4周時模型組大鼠腹腔注射一次STZ25mg·kg-1；對照組僅注射同體積檸檬酸緩沖液。三天后，斷尾采血測量空腹血糖篩選出符合空腹血糖≥7.0mmol·L-140只大鼠繼續(xù)喂養(yǎng)，建模時間8周（20只）和12周（20只）。于8周和12周處死大鼠前一天用代謝籠收集24h尿液測量微量尿蛋白。第二天先測空腹血糖，再測量大鼠體重，然后麻醉大鼠腹主動脈采血測血肌酐和血尿素氮，取腎動脈，采集右腎測其重量。2.T2DM腎病模型的鑒定：①FBG≥

3、7.0mmol·L-1，PBG≥11.0mmol·L-1且伴有胰島素敏感性（Insulin sensitive index，ISI）降低者；②糖尿病腎病早期腎臟肥大；③出現(xiàn)微量白蛋白尿，為成模指標。3.腎臟生化指標檢測：大鼠麻醉后，打開腹腔，腹主動脈采血離心取血清，用全自動生化分析儀檢測血尿素氮、血肌酐和尿蛋白。4.HE染色：喂養(yǎng)8周和12周的大鼠經(jīng)麻醉和腹主動脈采血處理后，取部分腎組織置于10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片、脫蠟、

4、HE染色、透明、封片等處理，應(yīng)用光鏡觀察腎臟組織結(jié)構(gòu)變化。5.電鏡觀察：另取部分腎組織置于2.5%戊二醛固定，常規(guī)脫水、滲透、包埋、切片等處理，應(yīng)用電鏡觀察腎臟組織超微結(jié)構(gòu)變化。6.實時熒光定量PCR：大鼠經(jīng)麻醉和腹主動脈采血后，采集腎動脈測定BKCa通道的ɑ,β1亞單位的表達水平。提取各組總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，用引物和SYBRgreen染料進行擴增。結(jié)果：(1)T2DM腎病大鼠模型建立：與對照組比較，①8周、12周大鼠的 FBG

5、≥7.0mmol·L-1，2h PBG≥11.0mmol·L-1且ISI降低（P<0.05）；②糖尿病腎病早期出現(xiàn)腎臟肥大，用腎臟肥大指數(shù)的指標來表示（P<0.05）；③出現(xiàn)微量白蛋白尿，用24h尿蛋白來表示（P<0.05）。(2)腎臟病變生化指標：8周、12周模型組血肌酐和血尿素氮濃度分別為44.00±4.07，49.73±2.98和6.28±1.40，9.90±1.55，與對照組比較，其濃度明顯增加（P<0.05），且12周比8周濃

6、度增加更加明顯。(3)腎臟病變形態(tài)學(xué)指標：①HE染色：與對照組比較，8、12周模型組腎小球及腎小管均有病理改變，可見程度不同的腎小球系膜細胞增生。②電鏡觀察結(jié)果：與對照組比較，8、12周模型組均可見基底膜均質(zhì)性增厚、部分足突融合、脫落，系膜區(qū)基質(zhì)增多。(4)在病程8周、12周T2DM腎病大鼠 BKCaɑ亞單位在腎動脈的表達量沒有明顯變化；(5)在病程8周、12周 T2DM腎病大鼠 BKCaβ1亞單位在腎動脈中的表達量降低。結(jié)論：(1)T