FFJ-5的體外抗腫瘤活性及其機制的研究.pdf

1、目的：研究大葉茜草素的結構修飾物FFJ-5體外抗腫瘤活性及其對EGFR-Akt-PKM2信號通路的影響。
　　方法：MTT法檢測大葉茜草素及其結構修飾物FFJ-5對A549和HepG2細胞生長活力的影響；流式細胞術檢測FFJ-5對A549和HepG2細胞周期的影響；Hoechst33342/PI共染高內(nèi)涵活細胞成像系統(tǒng)分析FFJ-5對A549和HepG2細胞凋亡的影響；ATP Assay Kit檢測 FFJ-5對 A549和 He

2、pG2細胞內(nèi) ATP生成量的影響；激光共聚焦顯微鏡檢測BCECF-AM（pH熒光探針）孵育后，F(xiàn)FJ-5對A549和HepG2細胞內(nèi)pH的影響；Western blot檢測FFJ-5對A549和HepG2細胞中EGFR、p-EGFR、Akt、p-Akt、PKM2、PARP、Cleaved PARP、Caspase3和Cleaved Caspase3等蛋白表達量的影響；激光共聚焦顯微鏡檢測Rh123(Rhodamine123)染色后，F(xiàn)F

3、J-5對A549和HepG2細胞線粒體膜電位的影響。
　　結果：⑴MTT結果顯示：FFJ-5的抗腫瘤活性顯著增強，Mollugin在A549和 HepG2細胞中的IC50值是分別是FFJ-5的7.8倍、5.6倍。⑵流式細胞術檢測結果顯示：FFJ-5可呈濃度依賴性的使A549和HepG2細胞的周期阻滯在G2/M期。⑶Hochst33342/PI共染結果顯示：FFJ-5可呈濃度依賴性地誘導A549和HepG2細胞的凋亡。⑷Wester

4、n blot結果顯示：FFJ-5能夠呈濃度依賴性的下調(diào)蛋白EGFR、p-EGFR、Akt、p-Akt、PKM2的表達。⑸ATP檢測結果顯示：FFJ-5呈濃度依賴性地抑制A549和HepG2細胞內(nèi)ATP的生成。⑹BCECF-AM結果顯示：FFJ-5可呈濃度依賴性地使A549和HepG2細胞中pH值降低。⑺羅丹明123染色結果顯示：FFJ-5可呈濃度依賴性地促使A549和HepG2細胞線粒體膜電位降低。⑻Western blot結果顯示：F

5、FJ-5在A549、HepG2細胞中，可激活Caspase3，使Cleaved-Caspase3表達升高、導致PARP加速水解，Cleaved-PARP蛋白表達呈現(xiàn)濃度依賴性地升高。
　　結論：①FFJ-5可顯著抑制A549和HepG2細胞的生長和增殖，使細胞阻滯在G2/M期，并呈濃度依賴性。②FFJ-5可下調(diào)PKM2蛋白表達，影響腫瘤細胞的能量代謝和腫瘤細胞生長的酸性微環(huán)境。③FFJ-5可通過EGFR-Akt-PKM2信號通路抑