龍葵皂苷分離純化、體外抗腫瘤活性及其分子機制研究.pdf

1、本文以從龍葵中分離得到的皂苷及solamargine為材料，以人肝癌細胞株SMMC-7721、人胃癌細胞株MGC-803、人非小細胞肺腺癌細胞株NCI-H157為體外實驗模型，通過MTT法進行體外抗腫瘤活性篩選，并以人胃癌細胞株MGC-803為靶細胞，對篩選出來的龍葵皂苷單體solanigroside P、β1-solasonine及solamargine進行初步抗腫瘤作用及機制的研究。全文分如下四部分。
　　 第一部分:龍葵皂

2、苷的分離純化研究龍葵藥材采用70％乙醇回流提取，經正丁醇萃取得浸膏，甲醇溶解后，采用丙酮-乙醚(1∶1)分部沉淀，不同的龍葵皂苷部位進行體外抗腫瘤活性篩選。對有活性的皂苷部位經過硅膠柱層析分離，采用甲醇-氯仿進行梯度洗脫，反復多次柱層析，得到龍葵皂苷。
　　 第二部分:龍葵皂苷體外抗腫瘤活性的篩選以人肝癌細胞株SMMC-7721、人胃癌細胞株MGC-803、人非小細胞肺腺癌NCI-H157為體外實驗模型，對龍葵皂苷部位、龍葵次級

3、皂苷及solamargine進行細胞毒性篩選。MTT結果顯示30％皂苷部位、龍葵次級皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine顯著抑制SMMC-7721、MGC-803、NCI-H157的增殖，其作用呈現(xiàn)濃度和時間依賴性。
　　 第三部分:龍葵皂苷對人胃癌細胞MGC-803誘導凋亡作用采用不同濃度的龍葵皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargin

4、e作用于人胃癌細胞MGC-803，蘇木素、姬姆薩、伊紅、Hoechst33258進行染色，并通過光學顯微鏡或熒光顯微鏡對細胞或細胞核形態(tài)變化進行觀察拍照。結果顯示細胞經處理后細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，如細胞數(shù)量減少，分布稀疏;有些細胞體積變小、變圓，細胞皺縮、變形;細胞核變形，核變小，核固縮，染色質發(fā)生凝固，熒光增強，有的呈現(xiàn)半月形，有些細胞核裂解為碎片，產生凋亡小體，表明細胞發(fā)生凋亡。
　　 采用PI對細胞進行染色，流式細胞儀檢測

5、，實驗結果顯示:經過龍葵皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine處理后細胞均出現(xiàn)細胞凋亡所特有的亞二倍峰(sub-G1)，細胞凋亡率隨著藥物濃度的增加而增大，呈現(xiàn)劑量依賴性。
　　 細胞周期分析結果顯示:經過龍葵皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine處理后，G0/G1期和G2/M期比率減少，處于S期的細胞明顯增多，細胞阻滯于S期。

6、>　　 第四部分:龍葵皂苷誘導人胃癌細胞MGC-803凋亡機制的研究采用免疫細胞化學檢測方法檢測基因表達，結果顯示，細胞經過20μg/mL龍葵皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine處理后，p53和Bcl-2表達減弱，Bax表達增強。
　　 綜上所述，龍葵皂苷及solamargine具有抑制SMMC-7721、MGC-803、NCI-H157生長的作用。對MGC-803細胞而言，藥