龍葵皂苷分離純化、體外抗腫瘤活性及其分子機(jī)制研究.pdf

1、本文以從龍葵中分離得到的皂苷及solamargine為材料，以人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721、人胃癌細(xì)胞株MGC-803、人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞株NCI-H157為體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，通過MTT法進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選，并以人胃癌細(xì)胞株MGC-803為靶細(xì)胞，對篩選出來的龍葵皂苷單體solanigroside P、β1-solasonine及solamargine進(jìn)行初步抗腫瘤作用及機(jī)制的研究。全文分如下四部分。
　　 第一部分:龍葵皂

2、苷的分離純化研究龍葵藥材采用70％乙醇回流提取，經(jīng)正丁醇萃取得浸膏，甲醇溶解后，采用丙酮-乙醚(1∶1)分部沉淀，不同的龍葵皂苷部位進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選。對有活性的皂苷部位經(jīng)過硅膠柱層析分離，采用甲醇-氯仿進(jìn)行梯度洗脫，反復(fù)多次柱層析，得到龍葵皂苷。
　　 第二部分:龍葵皂苷體外抗腫瘤活性的篩選以人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721、人胃癌細(xì)胞株MGC-803、人非小細(xì)胞肺腺癌NCI-H157為體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，對龍葵皂苷部位、龍葵次?/p>

3、皂苷及solamargine進(jìn)行細(xì)胞毒性篩選。MTT結(jié)果顯示30％皂苷部位、龍葵次級皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine顯著抑制SMMC-7721、MGC-803、NCI-H157的增殖，其作用呈現(xiàn)濃度和時間依賴性。
　　 第三部分:龍葵皂苷對人胃癌細(xì)胞MGC-803誘導(dǎo)凋亡作用采用不同濃度的龍葵皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargin

4、e作用于人胃癌細(xì)胞MGC-803，蘇木素、姬姆薩、伊紅、Hoechst33258進(jìn)行染色，并通過光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡對細(xì)胞或細(xì)胞核形態(tài)變化進(jìn)行觀察拍照。結(jié)果顯示細(xì)胞經(jīng)處理后細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，如細(xì)胞數(shù)量減少，分布稀疏;有些細(xì)胞體積變小、變圓，細(xì)胞皺縮、變形;細(xì)胞核變形，核變小，核固縮，染色質(zhì)發(fā)生凝固，熒光增強(qiáng)，有的呈現(xiàn)半月形，有些細(xì)胞核裂解為碎片，產(chǎn)生凋亡小體，表明細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　 采用PI對細(xì)胞進(jìn)行染色，流式細(xì)胞儀檢測

5、，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:經(jīng)過龍葵皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine處理后細(xì)胞均出現(xiàn)細(xì)胞凋亡所特有的亞二倍峰(sub-G1)，細(xì)胞凋亡率隨著藥物濃度的增加而增大，呈現(xiàn)劑量依賴性。
　　 細(xì)胞周期分析結(jié)果顯示:經(jīng)過龍葵皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine處理后，G0/G1期和G2/M期比率減少，處于S期的細(xì)胞明顯增多，細(xì)胞阻滯于S期。

6、>　　 第四部分:龍葵皂苷誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞MGC-803凋亡機(jī)制的研究采用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測方法檢測基因表達(dá)，結(jié)果顯示，細(xì)胞經(jīng)過20μg/mL龍葵皂苷solanigroside P、β1-solasonine及solamargine處理后，p53和Bcl-2表達(dá)減弱，Bax表達(dá)增強(qiáng)。
　　 綜上所述，龍葵皂苷及solamargine具有抑制SMMC-7721、MGC-803、NCI-H157生長的作用。對MGC-803細(xì)胞而言，藥