共生菌來源天然產(chǎn)物的體外抗腫瘤活性篩選及作用機制研究.pdf

1、為獲得微生物新藥的多樣性，科研人員逐漸將目光投向較少研究的特境微生物。共生菌在與宿主長期共進化過程中，易形成特殊的代謝途徑，能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎和活性顯著的次生代謝產(chǎn)物，是抗腫瘤新藥及先導(dǎo)化合物的豐富來源。
　　本學(xué)位論文首先采用MTT法對從共生菌發(fā)酵產(chǎn)物中分離獲得的15個天然化合物進行體外抗腫瘤活性篩選，測試細胞株為人肝癌細胞株HepG2和SMMC-7721，人宮頸癌細胞株HeLa，陽性對照藥為順鉑。結(jié)果顯示:①trichoverr

2、itone(4)、chaetoglobosin E(6)和penochalasin C(8)對HepG2細胞具有顯著的增殖抑制活性，IC50值分別為0.053、0.74和0.16μg/mL; dehydrovomifoliol(2)、cytoglobosin A(7)、Guxi-2(9)、deoxyleporin B(11)和fumigaclavine C(13)對HepG2細胞具有較強的增殖抑制活性，IC50值分別為7.62、7.33

3、、4.10、4.51和2.72μg/mL。②trichoverritone(4)、chaetoglobosin F(5)、penochalasin C(8)和fumigaclavine C(13)對SMMC-7721細胞具有顯著的增殖抑制活性，IC50值分別為0.12、0.94、0.56和0.65μg/mL; dehydrovomifoliol(2)、Guxi-2(9)和deoxyleporin B(11)對SMMC-7721細胞具有較

4、強的增殖抑制活性，IC50值分別為4.03、1.62和8.10μg/mL。③trichoverritone(4)、chaetoglobosin F(5)、 penochalasin C(8)、Guxi-2(9)、deoxyleporin B(11)和fumigaclavine C(13)對HeLa細胞具有顯著的增殖抑制活性，IC50值分別為0.13、0.18、0.84、0.17、0.23和0.13μg/mL; dehydrovomifo

5、liol(2)和chaetoglobosin E(6)對HeLa細胞具有較強的增殖抑制作用，IC50值分別為3.81和7.20μg/mL。黃花蒿內(nèi)生菌Myrotheciumroridum IFB-E091產(chǎn)生的新環(huán)肽化合物Guxi-2(9)對上述三株腫瘤細胞株均表現(xiàn)出較強的細胞毒活性，其抗腫瘤活性值得深入研究。
　　本學(xué)位論文還進一步研究了Guxi-2(9)、mytoxin B和myrothecine A對SMMC-7721細胞的

6、體外抗腫瘤活性機制。量效關(guān)系研究表明，在測試濃度梯度范圍內(nèi)，Guxi-2對SMMC-7721細胞的作用隨化合物濃度的增加明顯增強，具有明顯的劑量依賴性;myrothecine A對SMMC-7721細胞的作用隨著濃度的增加有一定的增強，表現(xiàn)出一定的劑量依賴性;而mytoxinB對SMMC-7721細胞的作用隨化合物濃度的增加沒有明顯的變化。時效關(guān)系研究表明，在測定時間范圍內(nèi)，Guxi-2、mytoxinB和myrothecineA對SM

7、MC-7721細胞的作用隨時間的延長有一定的增強，呈現(xiàn)一定的時間依賴性。細胞形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)，三個化合物都能不同程度地改變SMMC-7721細胞形態(tài)。細胞周期分析顯示，Guxi-2和mytoxin B能顯著誘導(dǎo)SMMC-7721細胞S期阻滯，而myrothecine A誘導(dǎo)SMMC-7721細胞S期阻滯的作用較弱。AnnexinⅤ/PI雙染色法發(fā)現(xiàn)，Guxi-2和mytoxin B能顯著提高SMMC-7721細胞的凋亡率，而myrothec

8、ine A對SMMC-7721細胞凋亡率的影響較小。Western blot分析顯示，Guxi-2和mytoxinB分別處理SMMC-7721細胞后，抑凋亡蛋白Bcl-2的表達下降、促凋亡蛋白Bax的表達增加，說明這兩個化合物可能都是通過下調(diào)Bcl-2蛋白的表達和上調(diào)Bax蛋白的表達來誘導(dǎo)SMMC-7721細胞凋亡;myrothecine A處理SMMC-7721細胞后，抑凋亡蛋白Bcl-2的表達有微弱變化，而促凋亡蛋白Bax的表達明顯